0 조회수 • 3:56 분 • April 30th, 2023
- 성체 파리에서 간접 비행 근육(IFM)은 흉부 전체에 걸쳐 있는 파리의 가장 큰 근육입니다. IFM은 초파리(Drosophila)를 포함한 두 날개 파리에서 특징적인 고주파 날개 움직임을 조율합니다. 두 개의 반대되는 근육 섬유 그룹이 IFM을 구성합니다.
첫째, 등쪽 종근(dorsal longitudinal muscle, DLM)은 장 위의 흉부의 정중면을 따라 위치하며 전방에서 후방까지 뻗어 있습니다. 둘째, 등쪽 복부 근육(DVM)은 흉부의 위에서 아래까지 뻗어 있으며 그 옆에는 TDT 또는 점프 근육이 있습니다. 두 근육 그룹 모두 큐티클에 부착되어 있습니다.
번데기 형성 또는 APF 후 약 48시간이 지나면 간단한 해부 현미경으로 성숙한 IFM을 육안으로 식별할 수 있습니다. 예제 프로토콜에서는 높은 처리량 분석을 위해 48시간 APF보다 오래된 번데기에서 IFM을 수집합니다.
- APF 48시간 후 IFM 해부의 경우, 가볍게 적신 페인트 브러시를 사용하여 단계화된 번데기를 현미경 슬라이드에 장착된 양면 접착 테이프 스트립으로 옮깁니다. 번데기를 일직선으로 향하게하고, 복부 쪽을 아래로, 앞쪽을 슬라이드 아래쪽으로 향하게 합니다. 번데기를 모두 놓았으면 집게를 사용하여 앞쪽 첨탑 위의 첫 번째 번데기 케이스를 떼어내고 열고 한 쌍의 집게를 뒤쪽으로 부드럽게 밀어 집게가 움직일 때 번데기를 자릅니다.
열린 케이스에서 번데기를 꺼내고 즉시 번데기를 두 번째 현미경 슬라이드의 PBS 한 방울로 옮깁니다. 번데기가 모두 풀리면 가는 가위를 사용하여 번데기의 복부를 흉부에서 잘라내고 복부를 별도의 더미로 밀어 넣습니다. 흉부를 모두 제거했으면 티슈 페이퍼를 사용하여 PBS의 대부분과 복부 더미를 제거합니다.
남은 흉부에 식힌 신선한 PBS 한 방울을 떨어뜨린 후 가위를 사용하여 머리에서 세로 몸체 축을 따라 한 번의 동작으로 잘라 흉부를 반으로 나눕니다. 번데기가 모두 해부되면 숫자 5 집게를 사용하여 반쪽 중 하나를 선택하고 IFM의 중간 위와 아래에 한 집게의 끝을 부드럽게 삽입합니다.
첫 번째 집게를 가만히 잡고 가위를 사용하여 IFM의 한쪽 끝을 큐티클과 힘줄에서 잘라낸 다음 번데기를 180도 회전하여 IFM의 다른 쪽 끝이 큐티클과 힘줄에서 분리될 수 있도록 합니다. 집게를 사용하여 물 장력을 사용하여 IFM 번들을 흉부에서 PBS 버블의 가장자리로 옮겨 번들을 제자리에 고정합니다.
그런 다음 시체를 슬라이드의 반대쪽으로 밀고 같은 방식으로 나머지 IFM을 해부합니다. 모든 IFM이 수집되면 숫자 5 겸자를 사용하여 샘플에 들어갔을 수 있는 점프 근육 또는 큐티클 조각을 제거합니다. 그런 다음 물 장력을 사용하여 한 쌍의 집게 사이에 절개된 IFM을 부드럽게 포착하고 IFM을 250마이크로리터의 냉각 PBS가 들어 있는 1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브에 넣습니다.