0 조회수 • 2:56 분 • April 30th, 2023
- 세척된 예쁜꼬마선충을 액체로 씻어 유리 표면에 붙이는 데 도움이 되는 화합물인 폴리라이신으로 코팅된 유리 슬라이드에 옮깁니다. 가장자리가 하단 슬라이드에 돌출된 상태에서 다른 유리 슬라이드를 똑바로 부드럽게 누릅니다. 지렁이를 손상 없이 움직이지 못하게 하려면 측면 움직임을 피하면서 동물을 압박하십시오. 그런 다음 액체 질소 또는 드라이 아이스와 같은 동결제로 채워진 절연 실험실 용기 내부의 금속 블록에 끼워진 벌레가 있는 유리 슬라이드를 놓습니다.
금속은 블록 표면이 웜의 큐티클을 두 유리 표면으로 빠르게 얼릴 수 있을 만큼 충분히 차갑도록 하는 효과적인 온도 전도체입니다. 일단 얼면 유리 슬라이드를 신속하게 분리하여 벌레 큐티클을 분리하거나 깨뜨립니다. 저투과성 큐티클이 파괴되면 화학적 고정제와 염색 항체가 내부 기생충 조직에 접근할 수 있으므로 조직 고정 및 염색을 진행합니다. 다음 프로토콜에서는 동결 균열 기술과 조직 고정에 대한 자세한 시연을 볼 수 있습니다.
- 먼저 벌레를 고칠 슬라이드를 준비합니다. 30 마이크로 리터의 폴리 -L- 라이신을 슬라이드에 피펫 한 다음 두 번째 슬라이드를 다른 슬라이드에 놓고 함께 문질러 용액을 양쪽에 고르게 펴 바릅니다. 이제 두 개의 슬라이드를 떼어내고 30분 동안 자연 건조시킵니다.
다음으로, 액체 질소로 채워진 용기에 평평한 금속 블록을 넣습니다. M9 용액으로 플레이트를 세척하고 웜이 들어있는 M9 약 10 마이크로 리터를 옮깁니다. 또는 웜을 선택하고 슬라이드에 M9를 추가합니다.
웜이 옮겨지면 커버슬립이 한쪽 가장자리에서 돌출되도록 커버슬립을 십자형으로 부드럽게 떨어뜨립니다. 그런 다음 옆으로 움직이지 않고 커버슬립을 부드럽게 누릅니다.
이제 즉시 슬라이드를 액체 질소의 금속 블록으로 옮기고 얼리십시오. 5분 후 돌출된 가장자리를 사용하여 커버슬립을 튕겨냅니다. 큐티클의 적절한 균열을 얻으려면 신속하게 이 작업을 수행하십시오.
다음으로, 섭씨 영하 20도의 메탄올로 채워진 유리 코플린 병에 슬라이드를 담그십시오. 5분 후 슬라이드를 아세톤으로 채워진 유리 코플린 병에 넣고 같은 온도에서 5분 더 옮깁니다. 슬라이드는 직접 염색하거나 섭씨 영하 20도에서 보관할 수 있습니다.