Four-Way Olfactometer Assay: 초파리에서 냄새 유발 반응을 평가하는 방법

- 4방향 후각계는 각 모서리에 단방향 포트가 있는 폐쇄형 챔버로, 이를 통해 최대 4개의 냄새를 전달할 수 있어 뚜렷한 냄새 프로파일을 가진 사분면을 생성할 수 있습니다. 깨어 있는 파리를 챔버로 옮기는 것으로 실험을 시작합니다. 마취는 실험 중 아기의 행동에 영향을 미칠 수 있으므로 피하십시오.

파리를 깨끗한 공기에 노출시키고 파리의 움직임을 관찰하여 냄새 물질이 후각계를 오염시키고 파리 행동에 영향을 미치지 않는지 확인합니다. 그런 다음 별도의 바이알에 테스트 냄새 물질을 준비하고 단방향 포트를 통해 메인 챔버에 연결합니다. 미리 정의된 기간 동안 파리를 냄새 물질에 노출시키고 시험이 끝난 후 자극을 제거합니다.

파리는 혐오스러운 냄새가 나는 사분면을 피하는 경향이 있는 반면, 매력적인 냄새가 나는 사분면으로 이동하여 정착합니다. 파리가 후각계를 탐색하면서 시간이 지남에 따라 위치를 추적하여 파리의 냄새 유발 행동 반응을 측정합니다.

다음 프로토콜에서는 공기 전달 시스템이 있는 4사분면 후각계를 사용하여 기피성 냄새 물질인 에틸 프로피오네이트와 매력적인 사과 사이다 식초에 대한 반응으로 파리 행동을 분석합니다.

- 최소 5분 전에 온도 조절기를 켜고 섭씨 25도로 설정하십시오. 그런 다음 플라스틱 튜브를 통해 냄새 챔버를 경기장에 연결합니다. 전자 유량계를 사용하여 경기장의 각 사분면의 공기 흐름 속도를 확인하십시오. 제어 장치와 냄새 및 공기 흐름이 모두 분당 100밀리리터로 작동하는지 확인하십시오.

- 파리는 공기 흐름에 매우 민감하므로 각 실험 전에 각 사분면의 공기 흐름을 확인하는 것이 중요합니다.

- 이제 70% 에탄올을 사용하여 경기장과 유리판을 청소합니다. 모든 부품을 두세 번 닦고 진행하기 전에 완전히 자연 건조시키십시오. 다음으로 유리판을 경기장에 고정합니다. 그런 다음 마취 없이 파리를 경기장으로 옮깁니다. 중력을 사용하여 유리판 중 하나의 구멍을 통해 들어가게 한 다음 구멍을 원형 메쉬로 덮습니다.

이제 파리가 장전된 투기장을 빛이 새지 않는 방에 배치하십시오. 그런 다음 4개의 제어 공기 흐름을 각 경기장 모서리에 연결합니다. 챔버의 문을 닫고 파리가 10-15 분 동안 새로운 환경에 적응하도록합니다.

적응 기간이 끝나면 파리를 4개의 제어 공기 흐름에 노출시키는 5-10분 대조 실험을 실행합니다. 이제 데이터를 즉시 분석하는 것이 중요합니다. 투기장에 파리가 고르게 분포되어 있지 않으면 투기장을 재설정해야 합니다.

- 공기를 정화하기 위해 방제 파리의 행동을 테스트하는 것이 중요합니다. 이렇게 하면 모든 배경 조건이 정상인지 빠르게 확인할 수 있습니다. 누출되는 빛, 온도 불균형, 기울어진 경기장 또는 냄새 오염은 모두 문제를 일으킬 수 있습니다.

- 필요한 경우 파리를 버리고 경기장을 다시 청소하십시오. 냄새 오염이 의심되는 경우 모든 튜브를 교체하십시오. 동물이 4개의 사분면 중 어느 것도 선호하지 않을 때까지 새로운 코호트로 대조군 테스트를 계속 반복합니다. 그런 다음 3방향 밸브를 사용하여 테스트 부취제 챔버를 설정에 연결하거나 튜브를 다시 연결하고 5-10분 동안 테스트 실험을 실행합니다. 더 긴 실험 기록의 경우 20분마다 추적 프로그램을 빠르게 중지하고 다시 시작하지 않으면 데이터 파일이 너무 커집니다.

테스트 사이에 파리를 버리고 경기장과 유리판을 70% 에탄올로 청소하고 커넥터 튜브를 교체하십시오. 건조한 공기 흐름을 유지하여 시스템을 지속적으로 세척합니다. 효율성을 위해 실행 중에 청소를 할 수 있도록 두 개의 경기장을 갖는 것이 좋습니다.

- 같은 날에 여러 실험을 실행하는 경우 이전 실행으로 인한 냄새가 시스템에 남아 있지 않도록 각별한 주의를 기울이십시오. 이것은 일반적으로 낮은 농도의 냄새 물질이나 CO2에서는 문제가 되지 않습니다. 그러나 고도로 집중된 자극의 경우 실험 실행 사이에 최대 24시간의 간격이 필요할 수 있습니다.