JoVE 실험 백과사전
생물학
0 조회수 • 4:28 분 • April 30th, 2023
- Y-미로는 직선 또는 테이퍼 튜브로 연결된 3개의 플라이 바이알이 있는 Y자형 커넥터로 구성됩니다. 파리는 자신이 선호하는 자극이 있는 쪽으로 미로를 통과합니다. 실험을 시작하려면 휘발성 화학 물질이 포함된 용액이 담긴 티슈 페이퍼를 각 바이알에 넣습니다. 그런 다음 테이퍼 튜브에 연결합니다. 가늘어진 관은 파리가 미로 중앙으로 돌아가는 능력을 제한하고 휘발성 화학 물질의 확산을 늦춥니다.
다음으로, 굶주린 파리를 차갑게 하여 속도를 늦춥니다. 분석 결과에 영향을 미칠 수 있으므로 화학 마취를 사용하지 마십시오. 차갑게 식힌 파리가 있는 유리병을 미로의 마지막 면으로 빠르게 연결하세요. 미로를 탐험하기 위해 파리를 남겨두세요. 밝은 빛으로 인한 선호도를 줄이려면 파리가 볼 수 없는 원적외선 아래에서 이 단계를 수행하십시오. 마지막으로 미로의 양쪽에 있는 파리를 세십시오. 미로 속의 그들의 위치는 그들이 휘발성 화학 냄새를 선호한다는 것을 나타냅니다.
예제 프로토콜에서는 야생형 초파리를 사용한 Y-maze 분석의 설정을 볼 수 있습니다.
- 다음 날 아침 분석을 수행하기 전에 하루가 끝날 때 10-20개의 실험 라인으로 구성된 코호트를 젖은 수건에서 수분을 공급한 유리 바이알로 옮깁니다. 파리는 16-18시간 내에 검사를 받아야 하며, 그렇지 않으면 건조나 굶주림으로 인해 죽을 수 있습니다. 다음 날, Y-미로를 조립합니다. 먼저 도관을 만드는 트리밍된 피펫 팁이 있는 폼 커넥터를 사용하여 Y자형 커넥터를 두 개의 유리 바이알에 결합합니다. 가늘어지는 모양은 이러한 일방통행 통로를 만듭니다.
"Y"의 세 번째 분기는 피펫 팁의 큰 부분으로 만들어진 로딩 튜브에 부착되어 로딩 바이알에서 미로의 선택 지점까지 통과할 수 있습니다. 각 테이퍼 터널 너머에는 유리 바이알이 있으며, 그 중 하나에는 냄새 물질이 적재되어야 합니다. 이것을 28mm 정사각형의 티슈 페이퍼에 담근 40마이크로리터 볼루스로 로드합니다. 둘 중 어느 것이 냄새 물질을 함유하고 있는지 무작위로 번갈아 가며 섭취해야 합니다.
테스트를 수행하려면 먼저 얼음 위에서 파리를 잠시 식혀 파리의 속도를 늦춥니다. 이것은 LED 전구의 원적외선 아래에서 섭씨 25도에 있어야 합니다. 파리 무리를 로딩 바이알에 부드럽게 떨어뜨리고 Y-미로에 테스트 파리를 로드합니다. 가스 마취를 사용하지 마십시오.
- 파리를 적재 바이알에 빠르고 부드럽게 옮기는 것이 매우
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