0 조회수 • 2:38 분 • April 30th, 2023
- 열 프로브 분석을 위해 초파리 유충을 준비하려면 원하는 발달 단계의 동물을 수집하고 단일 유충을 얇은 물막이 있는 테스트 플레이트로 옮깁니다. 물은 유충이 판 표면에 달라붙지 않고 자유롭게 움직일 수 있도록 합니다.
초파리 유충은 통각 수용기(nociceptor)로 알려진 표피의 다수상돌기 감각 뉴런을 통해 유해한 열 자극을 감지합니다. 이들은 잠재적으로 유해한 고온과 같은 특정 감각 임계값에 도달할 때까지 발사되지 않습니다.
열 프로브를 이 감각 임계값을 극복할 수 있는 온도로 설정하고 통각 수용기가 작동되도록 합니다. 프로브 끝을 유충에 대고 부드럽게 눌러 열을 가합니다. 유충은 열 통각 반응으로 유독성 온도에 반응하여 프로브에서 물러납니다. 유충이 열 프로브에서 360도 떨어진 곳에서 역할을 나타내거나 정의된 시간이 경과하면 중지합니다. 응답 시간을 기록합니다.
예시 프로토콜에서는 초기 세 번째 instar Drosophila 유충에 대한 국소 열 프로브 분석의 시연을 볼 수 있습니다.
- 먼저 열 프로브의 온도를 원하는 설정값으로 사전 설정합니다. 붓이나 집게를 사용하여 개별 유충을 평평한 플랫폼으로 부드럽게 옮기고 용암이 얇은 물막으로 덮이도록 합니다.
- 압력 변화를 최소화하고 열 프로브의 올바른 위치와 각도를 보장하기 위해 연습이 완벽합니다.
- 프로브 팁을 세그먼트 A4의 유충에 부드럽게 누르고 프로브와 유충 표면 사이에 약 45도 각도로 팁으로 가벼운 압력을 가합니다. 압력은 유충 표면에 약간의 움푹 들어간 곳을 유발해야 하며 일반적으로 이동을 방지하기에 충분합니다. 금단 반응이 나타날 때까지 또는 20초 컷오프에 도달할 때까지 유충을 계속 자극합니다.
반응하는 유충은 일반적으로 먼저 머리와 꼬리를 들어 올리는 예비 행동을 보인 다음 최소 360도로 구르는 철수 행동을 보입니다. 인출 동작이 시작되면 프로브와의 접촉을 해제하고 대기 시간 또는 인출에 걸린 시간을 기록합니다. 20초 이내에 금단 행동이 관찰되지 않으면 유충은 무반응입니다.