온도 구배 분석: 초파리 유충의 온도 선호도를 테스트하는 방법

- 초파리 유충의 온도 선호도를 테스트하려면 알루미늄 분석 플레이트의 한쪽을 가열하고 다른 쪽을 냉각하여 온도 구배를 만듭니다. 알루미늄은 열전도율이 높기 때문에 열이 효율적으로 전달되어 안정적인 선형 온도 구배를 생성합니다. 시스템이 평형을 이룬 후 동일한 크기의 온도 영역에서 플레이트 전체의 온도를 기록한 다음 플레이트 중앙에 깨끗한 유충을 로드합니다.

밝은 빛의 간섭을 제거하고 시험을 시작하기 위해 전체 시스템을 덮습니다. 유충은 너무 덥거나 너무 추운 혐오 구역을 피하고 유리한 온도의 구역에 정착하면서 구배를 통해 분포합니다. 이러한 동작을 thermotaxis라고 합니다. 유충의 온도 선호도를 평가하려면 각 온도 영역에 있는 동물의 수를 기록하십시오.

예제 프로토콜에서는 섭씨 18도에서 28도 사이의 단방향 온도 구배를 설정하는 방법과 분석 중에 유충을 처리하는 방법을 볼 수 있습니다.

- 단방향 그래디언트를 준비하려면 먼저 분석을 위한 습한 주변 환경을 만듭니다. 젖은 종이 타월에 별도의 수조에 연결된 두 개의 알루미늄 블록을 10cm 간격으로 놓습니다. 수조는 미리 예열해야 합니다. 다음으로, 100ml의 1% 아가로스를 만들고 평평한 표면의 각 분석 플레이트에 25ml를 추가합니다. 아가로스가 굳으면 멜라민 스펀지로 표면을 부드럽게 문질러 표면을 약간 거칠게 만듭니다.

그런 다음 효율적인 온도 전달을 촉진하기 위해 분석 플레이트의 알루미늄 블록 사이의 틈을 스프레이 병에서 전달된 물로 채웁니다. 이제 알루미늄 블록에 분석 플레이트를 놓고 경계가 알루미늄 블록의 가장자리와 정확히 일치하도록 양쪽 가장자리에서 2cm인지 확인합니다.

다음으로, 젤이 마르지 않도록 플레이트 표면에 물막을 뿌립니다. 다음으로, 증발을 줄이고 겔 표면의 온도를 안정화하는 데 도움이 되도록 판지 상자로 시스템을 덮습니다. 온도가 평형을 이룰 때까지 5-10분 동안 기다립니다. 그런 다음 최소 12개 위치에서 플레이트의 표면 온도를 확인하여 전체적으로 균일한 온도가 있는지 확인하고 섭씨 2도를 주거나 뺍니다. 그런 다음 분석이 수행될 때까지 상자 덮개를 교체합니다.

먼저 젤 위의 판지 상자를 제거하고 젤 표면 온도를 빠르게 확인합니다. 표면이 건조하면 표면에 소량의 물을 분사하십시오. 젤이 좋으면 작은 붓을 사용하여 각 판의 중앙에 100-200 마리의 유충을로드합니다. 그런 다음 각 분석 플레이트에 뚜껑을 씌워 유충을 가두고 판지 상자로 설정을 덮어 빛 노출을 방지합니다. 분석은 현재 진행 중입니다.

10-30분 후 판지 상자와 마이크로플레이트 뚜껑을 제거합니다. 그런 다음 위에서 접시를 촬영하여 유충의 위치를 기록합니다. 젤 표면에 반사되지 않도록 상자를 카메라 위에 놓습니다. 접시를 청소하려면 흩어졌을 수 있는 모든 유충을 흡인하십시오.

이제 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 각 구역의 유충 분포를 계산합니다. 분석 플레이트의 경계에 따라 2cm마다 선을 만들고 각 구역의 유충 수를 계산합니다.

- 계산할 때 각 가장자리에서 0.5cm 떨어진 지역에 분포하는 유충은 무시하십시오. 겔 두께와 온도 조건은 가장자리 근처에서 균일하지 않습니다.