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생물학
0 조회수 • 5:52 분 • April 30th, 2023
- 척추동물과 달리 초파리의 심장은 개방 순환계의 일부입니다. 성충 파리의 심장은 심근세포(cardiomyocytes)로 만들어진 튜브 모양의 구조로, 근육에 의해 표피에 연결되어 세포외 기질에 내장되어 있습니다. 심장실은 파리의 뒤쪽 끝에 있으며 혈림프를 대동맥으로 펌핑하여 열린 체강으로 흐릅니다.
곤충의 경우 혈림프는 혈액과 간질액 역할을 하며 영양분, 신호 분자 및 면역 세포를 운반합니다. 심장의 또 다른 특징은 관을 따라 뚫린 골(ostia)과 심장 내 판막(intracardiac valves)을 포함합니다. 심낭 세포는 심장관을 따라 국한되어 있으며 파리의 배설계의 일부입니다.
실험적인 심장 제제에서 인공 혈림프는 조직 기능을 보존하기 위해 생리학적 조건을 모방합니다. 천연 혈림프는 가스 교환에 대한 책임이 없지만 인공 혈림프는 기능적인 기관 시스템의 부족을 대체하기 위해 산소가 충분히 공급되어야 합니다. 다음 실험에서는 라이브 이미징 또는 전기 생리학을 위해 성체 파리의 반온전한 심장 제제를 시연합니다.
- 시작하기 전에 먼저 인공 혈림프 용액을 준비합니다. 이 용액에는 자당과 트레할로스가 포함되어 있으며, 박테리아 오염을 방지하기 위해 사용 직전에 냉장 저장 용액의 인공 혈림프에 첨가해야 합니다. 인공 혈림프를 실온으로 가져오고 최소 15분 동안 공기 버블링으로 용액에 산소를 공급합니다.
다음으로, 즉석에서 지방을 제거하는 데 필요한 표준 피펫 풀러를 사용하여 여러 개의 미세한 모세혈관을 당깁니다.
모든 준비가 끝나면 성충 파리는 마취해야 합니다. 이것은 2-5분 동안 낮잠을 자도록 짧은 노출을 사용하여 수행할 수 있지만 파리가 5분 이상 낮잠을 않도록 주의하십시오. 추위에 단기간 노출되는 것도 파리를 마취하는 데 사용할 수 있지만 이산화탄소는 심박수와 리듬에 더 오래 지속되는 영향을 미치므로 권장하지 않습니다.
다음으로, 마취된 파리를 등쪽이 아래를 향하게 하여 얇은 바셀린 층으로 코팅된 페트리 접시에 넣습니다. 날개와 몸통의 소수성 표피는 젤리에 가역적으로 달라붙어야 하지만 필요한 경우 파리의 위치를 변경할 수 있습니다. 초기 절단은 구부러진 스프링 가위를 사용하여 이루어집니다. 이것은 가위 날을 파리의 다리 아래에 놓고 목 근처의 흉부의 등쪽 표면을 향해 각도를 낮추어 수행됩니다.
머리, 복부 신경삭 및 다리는 한 번의 절단으로 제거됩니다. 일단 절단되면, 제제는 산소가 공급된 인공 혈림프 용액에 담근다. 스프링 가위를 사용하여 복부 분절 7과 8로 구성된 복부의 뒤쪽 끝을 한 번의 절단으로 제거합니다. 이것은 복부의 양쪽 가장자리를 따라 측면 절단을 할 수 있는 접근성을 제공하고 후방 장과 복부 표피 사이의 연결을 절단하는 역할을 합니다.
가위의 날을 복부 끝의 작은 구멍에 삽입하고 큐티클을 옆으로 자릅니다. 이렇게 하면 복부 큐티클의 한쪽 가장자리가 자유로워집니다. 집게로 플랩을 잡고 복부의 반대쪽 측면 가장자리를 따라 비슷한 절단을 만듭니다. 이제 복부 복부 표피의 해방된 피판을 제거할 수 있습니다.
장 및 기타 복부 장기는 일반적으로 보석상, 집게 및 부드러운 잡아당기기를 사용하여 단일 덩어리로 제거할 수 있습니다. 내부 장기를 제거하면 박동하는 심장관이 드러나는데, 이 심장관은 여전히 작은 관절 근육에 의해 등쪽 표피에 부착되어 있고 지방체로 둘러싸여 있습니다. 당겨진 모세관은 진공 소스에 부착된 플라스틱 1/16인치 튜브에 삽입됩니다. 흡입력은 팁 직경에 비례하므로 팁이 직경이 40미크론보다 큰 피펫을 사용해서는 안 됩니다.
일단 설치되면 이 흡입 시스템은 심장관 주변의 과도한 지방을 빨아들이는 데 사용됩니다. 또한 큐티클 주변에 쌓인 기포와 이물질을 제거하는 데 사용할 수 있습니다. 심장 자체를 만지지 않도록 각별한 주의를 기울여야 하며, 심장의 뒤쪽 부분은 매우 연약하기 때문에 그 부위는 완전히 피해야 합니다. 성인 초파리 심장관이 이제 노출되어 박동해야 합니다.
필요한 경우, 바셀린에서 큐티클을 부드럽게 들어 올린 다음 조심스럽게 다시 밟아 심장 조직과의 접촉을 피함으로써 큐티클과 부착된 심장의 위치를 변경할 수 있습니다. 이 시점에서, 제제를 목욕시키는 용액은 신선한 인공 혈림프로 교체해야 합니다. 이 제제는 조작하기 전에 산소화와 함께 20-30분 동안 평형을 이루도록 해야 합니다. 제제를 60분 이상 유지해야 하는 경우 신선한 인공 혈림프를 다시 관류해야 합니다. 이 준비는 이제 광학 기록에 사용할 준비가 되었으며 전기 생리학적 기록 또는 조직학적 조작에도 사용할 수 있습니다.