수명 분석: 예쁜꼬마선충(C. elegans) 수명 측정

- 선충 개체군의 평균 수명을 측정하려면 M9 완충액에서 발달적으로 동기화된 L1 유충으로 시작합니다. 유충의 밀도를 결정한 다음 각 플레이트에 50을 추가하십시오. 조건당 최소 3개의 복제 플레이트와 백업 플레이트를 준비합니다.

이러한 웜이 L4 단계에 도달할 때까지 정상적으로 발달하도록 합니다. 이제 플레이트에 FUdR을 추가하여 벌레가 자손을 생산하는 것을 방지할 수 있습니다. 또는 계산 후 매일 지렁이를 새 플레이트로 옮겨 한 세대의 수명만 측정하고 있는지 확인해야 합니다.

다음으로 수컷을 제거합니다. 이렇게 하면 실험에서 성별과 짝짓기 변수가 제거됩니다. 다음 날, 접시에 있는 살아있는 벌레의 수를 세어 자발적인 움직임이나 부드러운 손길에 대한 반응을 찾습니다. 죽은 벌레를 제거하고 숫자를 기록하십시오. 한 마리도 남지 않을 때까지 매일 살아남은 벌레를 세어보세요. 예제 프로토콜에서는 수명 분석의 시연을 볼 수 있습니다.

- 준비된 박테리아 파종 플레이트에 각각 50 마리의 L1 동물을 적재합니다. 배아가 L4 단계로 발달할 때까지 섭씨 20도의 인큐베이터에 플레이트를 설치합니다. L1에서 L4까지의 정상적인 개발에는 약 40시간이 걸립니다.

그런 다음 자손 생산을 방지하기 위해 각 플레이트에 160마이크로리터의 50x FUdR을 추가합니다. 그런 다음 수명은 일반적으로 자웅동체로만 측정되므로 수컷을 제거하십시오. 완료되면 플레이트를 섭씨 20도의 인큐베이터에 다시 포장합니다.

모든 벌레가 죽을 때까지 매일 생존 능력을 평가하십시오. 그렇게 하려면 움직이지 않는 각 선충의 머리를 백금 철사나 속눈썹으로 부드럽게 만지십시오. 반응하지 않는 동물은 죽었으므로 접시에서 제거해야 합니다. 이 루틴 중에 발생하는 모든 변칙을 기록해 둡니다.