C. 예쁜꼬마선충 생존 분석: 단기 독성 테스트

JoVE Encyclopedia of Experiments

생물학

0 조회수 • 2:56 분 • April 30th, 2023

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- 독성 테스트를 위해 화합물을 준비하고 분석 플레이트의 웰에 분배하는 것으로 시작합니다. 적절한 발달 단계의 웜을 각 웰로 옮기고 즉시 타이머를 시작합니다. 손상된 벌레를 기록하고 생존 계산에 포함하지 마십시오.

미리 결정된 시간이 지나면 각 우물에 아직 살아 있는 벌레의 수를 세십시오. 해부 현미경의 밝은 빛이나 플레이트를 부드럽게 두드리면 살아있는 벌레가 움직여야 합니다. 대부분의 동물이 죽을 때까지 각 시간 간격이 끝날 때마다 이 관찰을 반복합니다. 다음 프로토콜에서는 산화 스트레스를 유발하는 화합물인 파라콰트에 노출되는 동안 L4 유충의 생존 시간을 관찰할 것입니다.

- 이 시연에서는 파라콰트를 사용하여 산화 스트레스를 유도합니다. 함께 제공되는 프로토콜 텍스트에 설명된 대로 새로운 100밀리몰 파라콰트 용액을 준비합니다. 파라콰트는 유해하고 독성이 강한 화합물이므로 적절한 지침에 따라 취급해야 합니다.

40마이크로리터의 파라콰트 용액을 96웰 플레이트의 모든 웰에 피펫팅합니다. 최소 12개의 웰을 테스트된 모든 조건의 반복으로 사용합니다. 백금 와이어 웜 픽을 사용하여 5-8 마리의 L4 유충 동물을 모든 우물로 옮깁니다.

테스트된 모든 조건의 시작 시간과 종료 시간을 표시합니다. 96웰 플레이트를 섭씨 20도에 놓습니다. 시작 시간 한 시간 후, 해부 현미경을 사용하여 죽은 동물과 살아있는 동물의 점수를 매깁니다. 계산을 시작하기 전에 접시를 부드럽게 흔듭니다.

높은 강도의 빛을 발견한 후에도 움직이지 않는 벌레는 죽은 것으로 점수가 매겨집니다. 지렁이 모양, 꼬리, 머리 움직임을 고배율로 관찰하여 죽은 지렁이와 살아있는 지렁이를 구별하십시오. 대부분의 기생충이 죽을 때까지 매시간 생존율을 기록하고 이 분석을 최소 3회 이상 독립적으로 반복합니다.

각 시점의 생존율을 확인하려면 먼저 각 우물로 이송된 총 동물 수를 더하여 조건당 총 동물 수를 계산합니다. 이송 시 손상되거나 죽은 동물은 무시합니다. 다음으로, 모든 시점에 대해 조건별 총 죽은 동물 수를 계산합니다. 사망률과 생존율을 계산합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026