Egg Laying Assay: 예쁜꼬마선충의 알을 낳는 행동을 정량화하는 방법

- 알을 낳는 것을 정량화하기 위한 실험을 통해 이 행동에 영향을 미치는 신경학적 구성 요소와 환경적 단서가 밝혀졌습니다. 알을 낳는 행동의 변화는 신경근 또는 생식 기관에 대한 독성 효과를 나타낼 수 있습니다.

독성을 테스트하기 위해, 관심 화합물이 있거나 없는 선충 성장 배지 플레이트에서 발달 동기화된 난자를 키웁니다. 이 실험은 박테리아가 화합물을 대사하는 것을 방지하기 위해 열에 의해 죽은 박테리아 벌레 먹이를 사용합니다. 이 세대가 청년이 될 때까지 성장할 수 있도록 허용하십시오.

그런 다음 적절한 통제 또는 실험 조건에서 지렁이를 새 플레이트로 옮기고 24시간 동안 알을 낳도록 둡니다. 매일 성충을 새 접시에 옮기고 이전 접시에 있는 달걀을 세십시오. 성충이 산란을 멈출 때까지 계속하며, 야생형 벌레의 경우 약 5 일 동안 계속하십시오. 매일 성충 한 마리당 낳은 알의 수를 계산하고 실험이 끝날 때 총계를 더합니다.

예시 프로토콜에서는 C. elegans 난자 산란 분석을 사용하여 화학 요법 약물인 에토포시드(etoposide)의 생식 독성을 테스트합니다.

- DMSO 또는 에토포시드가 포함된 NGM 플레이트에서 성년이 될 때까지 섭씨 20도에서 64시간 동안 연령 동기화된 난자를 부화시킵니다. 5마리의 성충을 화학 물질이 없는 새 NGM 플레이트 또는 동일한 화학 전처리가 포함된 새 NGM 플레이트로 옮기고 24시간 동안 배양합니다.

방금 시연한 것처럼 성충을 새로운 NGM 플레이트로 옮기고 매일 난자 수를 세십시오. 또한 기어 다니거나, 죽거나, 내부적으로 부화한 벌레의 수를 세십시오. 텍스트 프로토콜에 따라 계산을 수행합니다.