터치 습관화 분석: 예쁜꼬마선충의 비연관 학습을 연구하는 방법

- 예쁜꼬마선충(C. elegans)은 몸을 따라 사인파를 생성하여 옆으로 움직입니다. 동물은 파동이 머리에서 꼬리로 전파될 때 앞으로 움직입니다. 반대로, 정현파가 꼬리에서 머리로 전파될 때 웜은 뒤로 움직입니다.

역전(reversals)으로 알려진 후진 운동(backward locomotion)은 짧고 자발적으로 발생하거나 감각 자극(예: 벌레의 앞쪽을 부드럽게 만지는 것)에 의해 촉발됩니다. 전방 터치 습관화 분석을 수행하려면 원하는 발달 단계의 이전에 동기화된 웜을 파종되지 않은 NGM 플레이트에서 분리하십시오.

살균 된 미세한 머리카락을 사용하여 몸의 앞쪽 부분에 부드러운 터치를 실시합니다. 이렇게 하면 웜이 반전을 수행하는 탈출 응답이 이끌어집니다. 웜이 회복하고 터치를 반복할 때까지 10초의 자극 간격을 허용합니다. 비연관 학습의 한 형태인 습관화를 평가하려면 반전이 더 이상 관찰되지 않을 때까지 터치 횟수를 기록합니다.

예시 프로토콜에서는 전방 터치 습관화 분석법의 시연을 볼 수 있습니다.

- 먼저, 화재 멸균 30게이지 백금 와이어 픽을 사용하여 약 10개의 동기화된 젊은 성인 벌레를 파종되지 않은 새로운 NGM 플레이트로 옮깁니다. 새 플레이트에 적응할 시간을 주기 위해 5분 동안 벌레를 방해하지 않고 그대로 두십시오. 그런 다음 나무 꼬치나 이쑤시개 끝에 붙어 있는 눈썹 털을 70% 에탄올에 찍어 소독합니다.

깨끗하고 보푸라기가 없는 티슈로 닦고 에탄올이 증발할 때까지 1분 동안 기다립니다. 눈썹 털을 사용하여 머리에 있는 벌레를 부드럽게 만집니다. 웜이 회복될 수 있도록 터치 사이에 10초 동안 터치를 반복합니다.

웜이 더 이상 뒤로 움직이지 않을 때까지 10초의 자극 간격을 허용하면서 계속 터치합니다. 이 습관화가 발생하기 위해 필요한 터치 횟수를 기록합니다.

- 접촉 사이에 10초의 간격을 두는 것은 동물의 회복 시간을 허용하고 일관된 습관 행동 분석을 얻는 데 도움이 되기 때문에 중요합니다.