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생물학
0 조회수 • 4:43 분 • April 30th, 2023
- 직면한 조건을 이해하고 그에 따라 대응하기 위해 예쁜꼬마선충(C. elegans)은 무엇보다도 다양한 화학 물질을 감지할 수 있는 고도로 발달된 화학 감각 시스템을 가지고 있습니다.
머리의 감각 뉴런, 양엽 및 내부 소음순 뉴런, 꼬리의 뉴런인 페이스미드 뉴런은 큐티클을 통해 외부 조건에 직간접적으로 노출됩니다. 이러한 화학감각 뉴런은 웜이 사용하는 관련 정보를 암호화하여 적절한 행동 반응을 일으키는데, 이를 화학주성(chemotaxis)이라고 합니다.
휘발성 냄새 물질 또는 미각 수용성 신호에 대한 화학주성 반응을 테스트하려면 원하는 발달 단계의 벌레를 분리하고 이전에 준비된 실험 영역에서 테스트 화학 물질에 노출시킵니다. 박테리아 식품 공급원에서 생성되는 것과 같은 유리한 화학 물질에 노출되면 C. elegans는 공급원에 대해 양성 화학주성을 나타냅니다.
반대로, 중금속과 같이 덜 유리하거나 독성이 있는 화학 물질에 노출되면 기생충은 부정적인 화학주성을 나타내어 화학 물질을 피합니다. 따라서 후각 또는 미각 돌연변이는 혐오스러운 화학 물질을 피하지 못하고 혐오스러운 상태를 피하는 야생형 동물과 달리 불리한 조건에 머물러 있습니다.
예제 프로토콜에서는 구리에 대한 웜의 혐오감을 테스트하는 화학주성 분석의 시연을 볼 수 있습니다.
- 하룻밤 배양 후, 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고 표시된 플레이트 밑면을 가이드로 사용하여 한천 가장자리에 갓 준비된 100 마이크로 리터의 0.5 몰 구리 2 황산염 용액을 피펫팅하여 외부 구리 장벽을 만듭니다. 25 마이크로 리터의 구리 2 황산염 용액을 피펫으로 사용하여 정중선 장벽을 만듭니다.
구리 2 황산염 용액이 박테리아 패치와 접촉하지 않는지 확인하고 구리 용액이 플레이트에서 건조되도록하십시오. 이식 후 5분마다 실험실 티슈로 용액을 플레이트 가장자리 근처에 가볍게 두드려 건조를 확인합니다.
분석 직전에 실험 유기체를 박테리아가 없는 한천 플레이트로 옮기고 선충이 1분 동안 자유롭게 움직여 과도한 박테리아를 제거하도록 합니다.
다음으로, 1ml의 M9를 마이크로 원심분리기 튜브로 벌레를 씻기 위해 24시간 전에 옮겨진 젊은 성인과 함께 플레이트에 피펫팅합니다. 선충을 3,000배 g으로 1분 동안 원심분리합니다.
벌레는 튜브 바닥에 펠릿을 형성해야 합니다. 웜 펠릿을 방해하지 않고 M9 용액을 흡입합니다. 웜 펠릿에 M9 용액 1ml를 추가합니다. 튜브를 뒤집어
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