Electrotaxis Assay: 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 이동을 관찰하는 방법
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- 감각 자극이 없으면 예쁜꼬마선충의 움직임은 일반적으로 앞으로 나아가며 반전과 회전(방향 전환을 초래하는 무작위 방향 전환 동작)에 의해 중단됩니다. 예쁜꼬마선충은 전기를 잘 받아들입니다. 즉, 전기장을 감지할 수 있습니다. 온화한 직류 또는 DC에 노출되면 웜은 음극 또는 음극 방향으로 중단 없는 직선 경로로 이동하며, 이를 전기 택시라고 합니다.
벌레의 움직임을 보다 정확하게 관찰하려면 동물을 미세유체 장치에 넣고 DC 전기장을 가합니다. 자기장의 방향을 반대로 하면 웜은 반대 방향, 즉 음극 방향으로 방향을 바꿉니다. 교류 AC를 적용하면 웜이 멈춥니다. 자기장의 방향이 번갈아 바뀌면 기생충의 신경 운동 체계가 압도되어 기생충이 움직이지 못하게 됩니다. DC 필드를 다시 적용하면 웜이 음극을 향해 전진 동작을 재개합니다.
다음 예제 프로토콜에서는 미세유체 장치에서 전기택시 분석을 보여주는 설정을 볼 수 있습니다.
- 방금 조립된 마이크로 채널을 모니터에 장착된 카메라가 있는 현미경의 xy-이동식 스테이지에 배치하여 이 단계를 시작합니다. 전원 공급 장치를 마이크로 채널의 전극에 연결합니다.
마이크로 채널의 저항이 약 0.6메가옴임을 확인한 후 마이크로 채널의 출력 튜브를 일회용 주사기에 부착합니다. 그런 다음 주입관의 입구를 M9 생리적 완충액에 현탁된 선충 용액에 담그십시오. 주사기 내부에 음압을 가하여 액체를 채널로 흡입합니다.
주입구 튜브와 배출구 튜브가 모두 채워지면 주사기를 분리하고 튜브의 상대 높이를 조정하여 채널 중앙에 웜을 배치하여 흐름을 정식으로 조작합니다. 그런 다음 두 튜브를 같은 높이에 평평하게 놓습니다. 일렉트로택시 실험 중 웜 샘플을 전환할 때 마이크로 채널 내부의 흐름을 0으로 유지하려면 두 입구 튜브를 동일한 높이로 수평을 맞춘 후 여전히 흐름이 있는 경우 서로에 대한 튜브의 높이를 약간 조정합니다.
- 흐름이 실제로 0인지 확신할 수 없는 경우 전기장의 극성을 변경한 다음 웜이 회전할 때 웜의 선형 속도를 평가하여 웜의 움직임을 역전시킬 수 있습니다.
- 이제 전원 공급 장치를 적절한 전압으로 설정하십시오. 전기 신호를 활성화하고 웜이 자기장에 순응할 때까지 1분 동안 사전 노출을 허용하면 이 시간 동안 웜이 음극을 향해 움직이기 시작해야 합니다. 시간이 지나면 녹음을 시작합니다.
실험이 끝나면 채널에서 모든 액체와 벌레를 제거합니다. 탈이온수로 챔버를 헹구고 장치를 섭씨 125도의 열판에 올려 건조시킵니다.
