Photomotor Response Assay: 조명 조건의 급격한 변화에 대한 애벌레 제브라피시의 행동 반응을 측정하는 방법

- 시작하려면 이식 피펫을 사용하여 10 개의 제브라 피시 배아를 20ml의 물이 채워진 비커로 옮깁니다. 이제 섭씨 28도에서 실험에 필요한 적절한 밝은 어두운 주기 아래에서 배아를 성장시킵니다. 다음으로, 유충을 우물 플레이트로 옮깁니다. 수영할 수 있는 충분한 공간을 제공하기 위해 각 우물에는 한 마리의 유충이 포함되어 있는지 확인하십시오.

이제 각 우물에 물을 완전히 채우십시오. 웰 플레이트를 행동 기록 챔버에 놓고 비디오 추적 소프트웨어를 사용하여 유충의 움직임을 추적합니다. 유충은 스트레스 수준 증가로 인해 비정상적인 명암 주기에 노출될 때 어두운 곳에서는 움직임이 증가하고 빛 속에서는 움직임이 감소합니다. 초기 기간의 마지막 1분과 다음 기간의 첫 1분 동안 이동한 평균 거리의 차이를 계산하면 물고기의 광운동 반응을 알 수 있습니다.

이 프로토콜에서는 카페인에 노출된 제브라피시와 팻헤드 미노 유충의 광운동 반응을 조사할 것입니다. 먼저, 실험용 물고기가 들어 있는 우물 플레이트를 행동 기록 챔버에 놓습니다. 그런 다음 이전에 개발된 추적 프로토콜을 엽니다. 비디오 추적 뷰어에서 모든 유충이 보이는지, 각 웰에 유충이 하나만 있는지, 웰이 정의된 관찰 영역과 정렬되어 있는지 확인합니다.

그런 다음 Experiment and Execute를 클릭합니다. 데이터의 이름과 저장 위치를 지정하고 여러 라이브 이미지 아이콘을 클릭하여 미리 정의된 모든 보기 영역을 강조 표시합니다. 마지막으로 녹음실의 패널을 닫고 컴퓨터 모니터에서 Background(배경)를 클릭한 다음 Start(시작)를 클릭합니다.