라이트-다크 선호도 테스트: 제브라피쉬의 불안 관련 행동을 연구하는 방법

0 조회수4:45 • April 30th, 2023

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- 먼저, 물고기의 행동에 영향을 줄 수 있는 외부 자극을 최소화하기 위해 테스트 영역 주변에 3면 인클로저를 만듭니다. 물 표면 반사를 방지하기 위해 오버헤드 확산 조명을 설정합니다. 다음으로, 어두운 구역과 밝은 구역으로 나뉘어진 경기장을 서식지 물을 섭씨 28도로 유지합니다.

인클로저에 경기장을 놓습니다. 테스트할 물고기가 들어 있는 서식지 탱크를 인클로저 외부에 두십시오. 물고기가 스트레스를 줄이기 위해 적응하도록 하십시오.

이제 서식지 탱크에서 물고기를 부드럽게 그물로 잡고 테스트 탱크에 넣습니다. 두 구역 중 하나에 편향되지 않도록 경기장의 긴 면에 수직으로 물고기를 배치하십시오. 녹음 소프트웨어를 사용하여 물고기의 행동을 관찰하고 나머지 물고기에 대해 테스트를 반복합니다. 밝은 영역과 어두운 영역에서 각 물고기가 보낸 평균 시간을 측정합니다.

제브라피쉬는 불안할 때 어두운 영역에서 더 많은 시간을 보내는 경향이 있습니다. 예제 프로토콜에서는 에탄올 노출이 제브라피시 행동에 미치는 영향을 관찰하기 위해 명암 테스트를 수행합니다.

- 너비 9 및 1/2 센티미터, 길이 55 센티미터, 깊이 9 및 1/2 센티미터의 흰색 방수 바닥이있는 명암 경기장을 확보하십시오. 벨크로를 사용하여 경기장 내부 벽에 흰색과 검은색 방수, 반사되지 않는 종이를 부착하고 경기장의 절반은 흰색으로, 절반은 검은색으로 덮습니다. 섭씨 25-28도의 온도에서 서식지 물로 경기장을 5cm 깊이까지 채웁니다. 테스트하는 동안 이 온도를 유지하십시오.

경기장을 배치할 흰색 3면 인클로저를 구성하여 외부 시각적 자극을 최소화합니다. 테스트 영역에 수면에 반사를 일으키지 않는 확산 오버헤드 조명이 있지만 움직임 추적 소프트웨어 또는 비디오 이미지에서 사후 수동 정량화를 할 수 있을 만큼 충분히 밝은지 확인하십시오. 그런 다음 연구 질문에 따라 5분에서 15분의 시험 기간으로 행동 추적 소프트웨어의 기록 및 움직임 분석 매개변수를 설정합니다.

실험할 물고기 무리를 서식지 수조의 연구 구역으로 운반하고 경기장 울타리 밖으로 나갑니다. 물고기가 10분 동안 적응하도록 합니다. 적절한 그룹의 물고기를 부드럽게 그물로 잡고 밝은 곳과 어두운 곳의 중앙에 놓고 물고기가 밝은 영역이나 어두운 영역으로 편향되는 것을 방지하기 위해 필드의 긴 축과 평행하게 위치할 때 각 물고기를 풀어줍니다.

동물이 풀려난 직후 행동을 기록하기 시작하십시오. 물고기를 추적하거나 물고기가 점프하거나 얼어붙는 데 소프트웨어 문제가 있는지 확인하십시오. 시험이 끝나면 경기장에서 물고기를 부드럽게 그물로 잡아 저장 탱크 또는 서식지 탱크로 옮깁니다. 피험자의 절반을 테스트한 후 투기장을 180도 회전시켜 투기장의 끝이 울챤 울짱의 열린 끝을 향

하고 있는 편향으로 인한 혼란을 방지한다.

밝은 영역과 어두운 영역에서 보낸 시간을 검사하여 분석을 시작합니다. 각 그룹 및 각 물고기에 대해 밝은 영역과 어두운 영역에서 보낸 상대적 시간을 구하고 하나의 표본 t-검정을 사용하여 분석하여 그룹이 한 영역을 다른 영역보다 유의하게 선호하는지 확인합니다. 선호도를 비교하려면 밝은 영역에서 보낸 시간에서 어두운 영역에서 보낸 시간을 빼서 선호도 지수를 계산하고 t-검정을 사용하여 그룹 간의 차이를 비교합니다. 필요한 경우 Tukey의 정직한 유의차 사후 검정을 활용하여 분산의 일원 분석으로 여러 그룹을 비교합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026