Optokinetic Response Assay: 제브라피시의 시력을 측정하는 방법

- 마취된 물고기를 눈과 아가미가 플랫폼 가장자리 너머로 뻗어 있도록 플랫폼에 고정합니다. 자유롭게 회전할 수 있는 조명이 밝은 드럼 안에 물이 채워진 실린더에 물고기를 똑바로 세웁니다. 아가미와 안구 움직임으로 표시된 물고기가 살아나면 흰색과 검은색 수직 줄무늬가 번갈아 나타나는 격자 또는 패턴을 드럼에 넣습니다. 이제 왼쪽 눈이 보이는 줄무늬 위에 검은색 단색 오클루더를 놓습니다.

회전을 시작하고 오른쪽 눈의 광역학 반응(OKR)을 기록합니다. OKR은 시각적 자극에 대한 반응으로 반사적인 안구 운동으로 구성됩니다. 눈의 움직임이 더 이상 관찰되지 않을 때까지 패턴을 점점 더 작은 흑백 줄무늬로 교체하십시오. 왼쪽 눈에 대해서도 동일한 절차를 수행합니다.

미세한 세부 사항을 구별하는 능력인 단안 시력을 계산하려면 눈의 수정체 중심에서 패턴까지의 거리와 안구 움직임이 관찰된 한 쌍의 흰색과 검은색 줄무늬의 가장 작은 패턴의 길이를 측정합니다. 예제 프로토콜에서는 광동반응(optokinetic response)을 사용하여 성체 제브라피시의 단안 및 양안 시력을 측정합니다.

- 광학 연구는 직경 14.5cm의 회전 드럼을 사용하는 맞춤형 녹음 장치, 광도 설정을 조정할 수 있는 실체 현미경, 컴퓨터 및 이미지 캡처 및 녹음을 위한 카메라로 수행됩니다. 컴퓨터로 작동되는 마이크로 컨트롤러는 회전 드럼 속도와 회전 방향을 조정하는 데 사용됩니다. 표준 조건에서 유지되는 물고기를 사용하여 0.016% 트리카인에 물고기를 2-3분 동안 마취한 다음 눈과 아가미를 가장자리에 매달아 작은 플랫폼에 올려 놓아 분석을 시작합니다.

부상을 입지 않으면서 물고기를 움직이지 않게 하려면 물고기의 몸에 얇은 스폰지나 수건을 깔고 물고기 위에 2-3개의 거품을 고정하여 꼬리의 움직임을 제한하십시오. OKR 기록 장치의 회전 드럼 내부에 맞는 원통형 물로 채워진 탱크 안에 물고기를 놓습니다. 플랫폼에 있는 자석을 사용하여 드럼 가장자리에서 약 7.3cm 떨어진 곳에 눈을 두고 물고기를 똑바로 세웁니다.

물고기가 마취에서 회복하고 정상적인 호흡과 무작위 안구 운동이 관찰되면 0.07 사이클 당 CPD의 기본 격자를 회전 드럼에 놓고 컴퓨터 제어 장치를 작동하여 회전 및 비디오 캡처를 시작합니다. 기본 격자에 의해 초기 OKR이 유도된 후 회전을 잠시 일시 중지하고 격자를 더 높은 공간 주파수를 가진 더 작은 격자로 바꿉니다. OKR을 더