Optokinetic Response Assay: 제브라피시의 시력을 측정하는 방법

0 조회수4:02 • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- 마취된 물고기를 눈과 아가미가 플랫폼 가장자리 너머로 뻗어 있도록 플랫폼에 고정합니다. 자유롭게 회전할 수 있는 조명이 밝은 드럼 안에 물이 채워진 실린더에 물고기를 똑바로 세웁니다. 아가미와 안구 움직임으로 표시된 물고기가 살아나면 흰색과 검은색 수직 줄무늬가 번갈아 나타나는 격자 또는 패턴을 드럼에 넣습니다. 이제 왼쪽 눈이 보이는 줄무늬 위에 검은색 단색 오클루더를 놓습니다.

회전을 시작하고 오른쪽 눈의 광역학 반응(OKR)을 기록합니다. OKR은 시각적 자극에 대한 반응으로 반사적인 안구 운동으로 구성됩니다. 눈의 움직임이 더 이상 관찰되지 않을 때까지 패턴을 점점 더 작은 흑백 줄무늬로 교체하십시오. 왼쪽 눈에 대해서도 동일한 절차를 수행합니다.

미세한 세부 사항을 구별하는 능력인 단안 시력을 계산하려면 눈의 수정체 중심에서 패턴까지의 거리와 안구 움직임이 관찰된 한 쌍의 흰색과 검은색 줄무늬의 가장 작은 패턴의 길이를 측정합니다. 예제 프로토콜에서는 광동반응(optokinetic response)을 사용하여 성체 제브라피시의 단안 및 양안 시력을 측정합니다.

- 광학 연구는 직경 14.5cm의 회전 드럼을 사용하는 맞춤형 녹음 장치, 광도 설정을 조정할 수 있는 실체 현미경, 컴퓨터 및 이미지 캡처 및 녹음을 위한 카메라로 수행됩니다. 컴퓨터로 작동되는 마이크로 컨트롤러는 회전 드럼 속도와 회전 방향을 조정하는 데 사용됩니다. 표준 조건에서 유지되는 물고기를 사용하여 0.016% 트리카인에 물고기를 2-3분 동안 마취한 다음 눈과 아가미를 가장자리에 매달아 작은 플랫폼에 올려 놓아 분석을 시작합니다.

부상을 입지 않으면서 물고기를 움직이지 않게 하려면 물고기의 몸에 얇은 스폰지나 수건을 깔고 물고기 위에 2-3개의 거품을 고정하여 꼬리의 움직임을 제한하십시오. OKR 기록 장치의 회전 드럼 내부에 맞는 원통형 물로 채워진 탱크 안에 물고기를 놓습니다. 플랫폼에 있는 자석을 사용하여 드럼 가장자리에서 약 7.3cm 떨어진 곳에 눈을 두고 물고기를 똑바로 세웁니다.

물고기가 마취에서 회복하고 정상적인 호흡과 무작위 안구 운동이 관찰되면 0.07 사이클 당 CPD의 기본 격자를 회전 드럼에 놓고 컴퓨터 제어 장치를 작동하여 회전 및 비디오 캡처를 시작합니다. 기본 격자에 의해 초기 OKR이 유도된 후 회전을 잠시 일시 중지하고 격자를 더 높은 공간 주파수를 가진 더 작은 격자로 바꿉니다. OKR을 더 이상 도출할 수 없을 때까지 순차적으로 더 작은 격자를 사용하여 이 프로세스를 반복합니다. OKR의 손실을 확인하려면 수정된 계단 접근 방식에 따라 OKR을 유발한 가장 작은 격자로 다시 테스트한 다음 OKR의 손실을 확인하기 위해 응답을 유도하지 못한 격자로 다시 테스트합니다.

단안 시력 측정값을 얻으려면 반대쪽 눈에 인접한 줄무늬 위에 검은색 플라스틱 폐색기를 놓고 데이터 수집 프로세스를 반복합니다. 그런 다음 오클루더의 위치를 변경하고 측정을 수행하여 다른 쪽 눈으로 전환합니다. 어항 아래에 있는 참조 측정 스트립을 사용하여 정확한 시력 측정을 위해 스트립에서 각 눈까지의 거리를 기록하십시오.

시력을 결정하기 위해 다음 공식을 사용하여 CPD를 계산하며, 여기서 a는 렌즈 중심에서 격자까지의 거리이고 h는 OKR이 관찰된 가장 작은 격자의 한 주기의 길이입니다. 시력을 종합적으로 측정하려면 왼쪽 눈과 오른쪽 눈 모두에서 계산된 평균 값을 사용합니다.

13:01

이미지 Zebrafish의 눈 개발에 가벼운 시트 형광 현미경을 사용하여

관련 동영상

0 조회수

10:07

물고기는 눈을 통해 당뇨병을 공부: 기정, 시각화, 및 성인 tg(fli:EGFP) Zebrafish 망막 맥 관 구조 분석

관련 동영상

0 조회수

11:01

Ex Vivo 실험 이미징에 대 한 성인 제 브라에서 준비 신선한 망막 조각

관련 동영상

0 조회수

09:39

라이트 농도의 변화에​​ Zebrafish의 응답을 측정하기 위하여 행동 어세이

관련 동영상

0 조회수

08:59

zebrafish의 시각 기능을 연구하기 위해 optokinetic 응답을 사용하여

관련 동영상

0 조회수

05:51

VisioTracker, 눈 돌림 분석에 대한 혁신적인 자동화 된 접근

관련 동영상

0 조회수

02:20

Photomotor Response Assay: 조명 조건의 급격한 변화에 대한 애벌레 제브라피시의 행동 반응을 측정하는 방법

관련 동영상

0 조회수

03:04

제브라피시 회피 및 티그모타시스 분석: 혐오스러운 시각적 자극에 대한 반응으로 유충의 행동을 조사하는 고처리량 방법

관련 동영상

0 조회수

04:56

Zebrafish의 시력의 정량적 측정과 Optokinetic 응답

관련 동영상

0 조회수

08:34

테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석는 Xenopus laevis의

관련 동영상

0 조회수

마지막 업데이트: 1 8월 2026