제브라피시 회피 및 티그모타시스 분석: 혐오스러운 시각적 자극에 대한 반응으로 유충의 행동을 조사하는 고처리량 방법

- 시작하려면 6 레인 아가로 스 플레이트의 각 레인에 5 개의 유충을 배치하십시오. 달걀 물을 더 추가하되 레인을 너무 많이 채우지 마십시오. 달걀 물에는 곰팡이 성장을 방지하는 메틸렌 블루가 포함되어 있습니다. 유충이 스트레스를 줄이기 위해 최소 10분 동안 적응하도록 하십시오.

이제 웰 플레이트를 이미징 챔버의 노트북 화면 위에 놓습니다. 웰 플레이트에 카메라의 초점을 맞춥니다. 레인을 계란물로 완전히 채우십시오.

다음으로, 타임랩스 이미지를 촬영하여 빈 배경에 놓인 유충의 행동을 기록합니다. 노트북 화면에 움직이는 빨간색 막대를 표시하고 움직이는 빨간색 막대에 반응하여 유충의 타임랩스 이미지를 촬영합니다.

붉은 모양은 위협, 혐오스러운 자극으로 인식되며 유충 스트레스를 유발합니다. 이에 대한 응답으로 그들은 막대를 피하고 긍정적 인 thigmotaxis를 보여줍니다. 긍정적 인 thigmotaxis는 벽과의 접촉을 추구하고 레인의 가장자리에서 수영하는 자극에 대한 물고기의 반응입니다.

예시 프로토콜에서는 제약 화합물 또는 환경 독소로 처리된 제브라피시 유충의 회피 및 도둑전술 반응을 분석할 것입니다.

- 이미지 캡처를 시작하려면 유충 스트레스를 줄이는 데 도움이 되도록 유충을 페트리 접시에서 아가로스 레인으로 조심스럽게 이동합니다. 각 레인에는 최대 20마리의 유충을 배치할 수 있지만 일반적으로 레인당 5마리의 유충을 사용하여 수영 속도를 가장 정확하게 추적하고 실험당 필요한 유충 수를 줄입니다.

실험에 따라 의약품 또는 독성 물질을 사용하거나 사용하지 않고 계란 물로 레인을 채웁니다. 넘침을 방지하기 위해 이미징 캐비닛에 넣을 때까지 레인을 끝까지 채우지 마십시오. 유충이 적응할 때까지 10분 동안 기다립니다. 순응 기간이 끝나면 4개의 플레이트를 노트북 화면 바로 위에 직접 손으로 놓습니다.

이때 레인은 계란물이나 화학 처리로 채워져 레인 상단과 수평이 되도록 하여 이미지에서 레인 가장자리의 그림자를 제거할 수 있습니다.

타임랩스 촬영을 위해 컴퓨터를 프로그래밍하고 실험당 총 300개의 이미지를 위해 6초마다 사진을 찍습니다. 비디오 속도로 이미징하기 위해 카메라를 더 낮은 해상도로 설정하십시오. 해상도가 낮을수록 단일 멀티 웰 플레이트로 녹화가 제한되지만 비디오 녹화는 빠른 수영 이벤트를 이미징하는 데 적합합니다.

PowerPoint 프레젠테이션을 유충에 대한 혐오적 자극으로 사용합니다. 이 데모에서 PowerPoint는 15분 동안 빈 흰색 배경으로 시작한 다음 15분 동안 접시의 위쪽 절반에 움직이는 빨간색 막대가 표시됩니다. 아가로스 레인 내에서 액체가 증발하는 것을 방지하려면 최대 이미징 시간을 1시간 미만으로 유지하십시오.