JoVE 실험 백과사전
생물학
0 조회수 • 2:52 분 • April 30th, 2023
- 시작하려면 3개의 페트리 접시에서 배아를 성장시킵니다. 첫 번째는 Hank's solution(균형 잡힌 소금 용액)을 포함하는 제어판입니다. 두 번째와 세 번째 플레이트에는 서로 다른 농도의 잠재적인 신경독성 화합물이 포함된 Hank's solution이 있습니다.
노출 용액에 포함된 신경독성 화합물은 수동 확산을 통해 배아의 외막을 관통하고 주의력, 조정력 및 근육 활동과 같은 신경계의 과정을 변화시킵니다. 배아가 적절한 연령의 유충으로 발달하면 각 유충을 48웰 플레이트의 개별 우물로 옮깁니다. 각 동물의 치료 상태를 추적하십시오.
웰 플레이트를 녹음 플랫폼으로 옮기고 덮개를 아래로 당깁니다. 유충이 10분 동안 적응하도록 합니다. 소프트웨어를 사용하여 밝은 기간과 어두운 기간의 교대 주기를 설정합니다.
제브라피시 유충은 일반적으로 어둠 속에서 더 많은 움직임을 보이고 빛 속에서는 덜 움직임을 보입니다. 각 기간에 대조군의 유충과 노출 그룹이 이동한 총 거리를 기록합니다. 화합물이 신경독성이 있는 경우 유충은 대조 동물보다 어둠과 빛 속에서 훨씬 더 많은 움직임을 보입니다.
다음 프로토콜에서는 신경독성 화합물에 노출된 제브라피시 유충에 대한 행동 테스트를 수행합니다.
- 실험을 수행하기 최소 2시간 전에 실내 온도를 섭씨 28도로 설정하고 48웰 마이크로플레이트의 각 웰에 800마이크로리터의 노출 용액을 추가합니다. 그런 다음 변형된 팁이 있는 1ml 피펫을 사용하여 200마이크로리터의 노출 용액에 있는 유충 하나를 마이크로플레이트의 각 웰로 옮기고 이동 및 경로 각도 실험을 준비합니다.
모든 매개변수가 설정되면 시험실의 조명을 낮추고 유충이 10분 동안 시스템에 적응할 때까지 기다립니다. 적응 기간이 끝나면 Experiment and Execute(실험 및 실행)를 클릭하고 실험 파일을 저장할 폴더를 만듭니다. 그런 다음 결과 이름을 입력하고 배경 및 시작을 클릭합니다.
실험이 끝나면 실험 및 중지를 클릭합니다. 그런 다음 후속 실험을 위해 48웰 마이크로플레이트를 다시 광 인큐베이터로 반환합니다.