눈 렌즈 해부: 제브라피시 렌즈 형태를 관찰하는 기술

- 제브라피시 눈은 각막, 공막, 수정체, 망막으로 구성됩니다. 각막은 빛이 눈으로 들어갈 수 있도록 하는 투명한 조직입니다. 공막은 각막과 연속적으로 외부 보호층을 형성하는 불투명한 조직입니다. 수정체는 빛을 신경 신호로 변환하는 감광성 조직층인 망막에 빛을 집중시키는 구형 구조입니다.

눈을 해부하려면 페트리 접시에 실리콘을 채우고 굳히십시오. 이제 마취된 생선을 접시에 넣고 마이크로 가위를 사용하여 눈을 절제합니다. 조직의 pH를 일정하게 유지하기 위해 PBS로 채워진 플레이트에 눈을 옮기고 뒤쪽이 위를 향하도록 눈의 방향을 잡습니다. 집게로 눈을 잡고 공막과 망막을 조심스럽게 세 번 방사형으로 자릅니다.

그런 다음 조직을 접어 수정체를 드러냅니다. 이제 앞쪽이 위를 향하도록 눈을 놓고 공막과 망막을 제거합니다. 절개된 눈에서 수정체를 퍼내고 주변에 남아 있는 조직을 제거합니다. 다음 프로토콜에서는 렌즈 형태를 분석하기 위해 유충 및 성체 제브라피시 렌즈 해부를 수행합니다.

트리카인으로 충분한 진정 효과를 확인한 후, 현미해부 가위를 사용하여 성체 또는 애벌레 제브라피쉬의 양쪽 눈을 즉시 절제하고 PBS로 채워진 실리콘 해부 틀이 있는 35mm 맞춤형 페트리 접시에 두 눈을 넣습니다. 다 자란 제브라피시에서 수정체를 채취하려면 눈을 뒤쪽이 위로 향하게 놓고 광학 디스크를 통해 45도 미만의 각도로 집게를 삽입합니다. 해부 가위를 사용하여 망막과 공막을 통해 시신경에서 움직이지 않는 눈의 섬모 영역까지 2-3개의 방사상 절개를 만들고 망막과 공막을 꽃잎처럼 벗겨냅니다. 눈을 뒤집고 각막면이 위로 향하게 한 다음 가위의 평평한 면을 사용하여 공막과 각막을 조작하여 간접적으로 수정체를 고정하고 집게를 사용하여 망막과 부착된 조직을 제거합니다. 그런 다음 렌즈에서 여분의 조직을 조심스럽게 잘라냅니다.

유충 제브라피시 렌즈 수확의 경우, PBS의 실리콘 접시의 평평한 부분에 유충 눈의 뒤쪽 면을 위로 향하게 합니다. 그리고 날카로운 텅스텐 바늘을 사용하여 망막과 공막을 무선 절단하고 다른 바늘이나 집게로 눈을 고정시킵니다. 그런 다음 맞춤형 텅스텐 와이어 바늘의 뭉툭한 면으로 해리된 눈에서 수정체를 부드럽게 퍼내고 부착된 조직을 조심스럽게 잡아냅니다.