성체 제브라피시 전기생리학: 생체 내 뉴런의 세포 외 전기 활동을 측정하는 방법

- 뉴런은 활동 전위를 통해 전기 충격을 전파합니다. 뉴런이 휴지 상태에 있을 때는 나트륨 이온의 유입보다 칼륨 이온의 유출 속도가 느려져 막 전위의 변화를 일으킵니다. 이로 인해 나트륨 이온 채널이 열리고 나트륨 이온이 유입되어 전기 충격이 발생합니다.

세포 내에서 이러한 활동을 연구하는 방법을 전기 생리학이라고합니다. 성인 제브라피쉬의 콧구멍에 보조 전극 팁을 삽입하여 절차를 시작합니다. 다음으로, 노출된 시신경 구조 내에 1차 전극을 표면적으로 삽입하여 세포 외 신경 활동을 측정합니다.

1차 전극은 이를 둘러싼 모든 세포의 세포외막 전위를 측정합니다. 신호는 이러한 모든 세포의 결합된 막 전위를 나타냅니다. 전극은 신호를 감지하여 멤브레인 전위의 시각적 디스플레이를 제공하는 증폭기(오실로스코프)와 컴퓨터로 전송합니다.

판독값을 관찰하고 1차 전극과 2차 전극 사이의 전기적 차이를 분석합니다. 전기 생리학적 측정은 비교입니다. 예제 프로토콜에서는 성체 제브라피시의 신경 활동에 대한 약리학적 화합물의 효과를 측정할 것입니다.

- 전기생리학 기록을 위해 삽관 마개를 끄고 삽관 베이스와 트리카인 드립을 연결하는 Leur 잠금 장치를 빠르게 분리합니다. 온전한 삽관 설정을 전기생리학 현미경으로 옮기고 관류 시스템에 연결합니다. 서식지 물을 켜고 약 1시간 동안 분당 1밀리리터의 속도로 관류하여 트리카인을 씻어냅니다.

마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 전극 팁이 동물의 콧구멍 또는 위턱 아래의 딥에 삽입될 수 있도록 보조 전극을 배치합니다. 그런 다음 1차 전극 바늘을 개두구 구멍에 삽입합니다. 그런 다음 바늘을 조직에 삽입하여 팁이 시신경 구조 내에서 상당히 표면적으로 위치하도록 합니다.

전극의 위치가 깊을수록 작은 전기 신호가 발생할 수 있습니다. 데이터 수집을 위해 5,000Hz 샘플링 속도의 갭 프리 모드와 0.1kW의 저역 통과 필터 및 1Hz의 고역 통과 필터가 사용됩니다. 서식지 물이 최소 45분 동안 관류되었을 때 전기 생리학적 활동의 기록을 시작합니다. 실험 약물을 추가하기 전에 최소 15분 동안 기본 활성의 기준선을 기록합니다.