JoVE 실험 백과사전
생물학
0 조회수 • 2:47 분 • April 30th, 2023
- 트리카인 마취된 물고기를 젖은 스펀지에 등쪽이 위를 향하도록 옮깁니다. 물고기가 들어 있는 스펀지를 현미경 아래에 놓습니다. 마이크로 주사 바늘을 몸 축에서 45도 각도로 등쪽 근육 근처에 놓습니다.
다음으로, 비늘로 덮여 있지 않은 등지느러미 앞 지점을 찾아 큰 힘을 가하지 않고 바늘을 삽입할 수 있습니다. 그런 다음 바늘을 부드럽게 삽입하고 페놀 레드와 같은 마커와 함께 관심 화합물을 근육에 천천히 주입합니다.
관심 화합물에 유전 물질이 포함되어 있는 경우 주입 부위의 양쪽에 전극을 배치하고 전류를 투여하여 세포를 전기천공합니다. 전류는 근육 세포를 투과할 수 있게 만들고 유전 물질을 효율적으로 흡수할 수 있게 합니다. 절차가 끝나면 즉시 물고기를 회수 탱크로 옮깁니다. 다음 프로토콜에서는 진균증에 대한 DNA 백신을 전달하기 위해 성인 제브라피쉬에 근육 주사를 수행합니다.
주입하는 동안 물고기를 고정된 위치에 유지하려면 중간에 홈이 자른 스펀지 조각을 패딩으로 사용하십시오. 스펀지를 시스템 물에 완전히 담그고 페트리 접시에 넣으십시오. 플라스틱 숟가락을 사용하여 마취된 제브라피시를 물고기의 복부 쪽이 홈에 아래로 향하게 하여 젖은 스펀지로 옮깁니다. 현미경으로 바늘을 제브라피쉬의 등쪽 근육에 45도 각도로 가까이 놓습니다. 그런 다음 등지느러미 앞에 비늘이 없는 작은 점을 찾아 바늘을 근육에 밀어 넣습니다.
저항이 느껴지면 인접한 지점을 시도하십시오. 풋 스위치를 사용하여 플라스미드 용액을 근육에 서서히 주입합니다. 현미경으로 보면 페놀 레드가 근육 조직에 들어갈 때 볼 수 있어야 합니다.
주입 부위의 각 측면에 핀셋 유형 전극을 배치하여 주입 직후 물고기를 전기천공합니다. electroporator의 시작 버튼을 누르고 40볼트, 50밀리초 펄스를 6회 제공합니다. 그런 다음 물고기를 회수 탱크로 부드럽게 옮깁니다. 마지막으로, 텍스트 프로토콜에 따라 물고기를 마취한 후 UV 광선을 사용하여 주입 부위 근처에서 EGFP 발현을 확인합니다.