복강내 주사(Intraperitoneal Injection): 성체 제브라피시의 복강으로 용액을 전달하는 방법

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생물학

0 조회수 • 2:53 분 • April 30th, 2023

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- 성어를 주사하기 전에 24시간 동안 금식하여 위장관을 비우고 복부에 추가 공간을 만듭니다. 시술 당일에는 트리카인으로 물고기를 마취하고 복부 쪽이 위를 향하도록 젖은 스펀지의 구멍에 넣습니다.

다음으로, 원하는 양의 주사 용액을 실험실 필름 조각에 피펫으로 넣고 인슐린 바늘로 당깁니다. 골반 지느러미 사이에 바늘을 전후 몸체 축에서 45도 각도로 놓고 정중선에서 부드럽게 밀어 넣습니다. 바늘을 복강, 복벽과 내부 장기 사이의 공간으로 약 1-2mm 정도 전진시키고 관심 용액을 천천히 주입합니다. 엎지르지 않도록 바늘을 뽑기 전에 5초 동안 기다리십시오. 이제 조심스럽게 바늘을 제거하십시오.

주입 후 물고기를 담수 탱크 물이 들어있는 회수 탱크로 빠르게 옮깁니다. 물고기가 즉시 수영을 시작하지 않으면 아가미 근처에서 물을 휘젓고 마취에서 회복할 수 있도록 돕습니다. 예시 프로토콜에서는 감염을 연구하기 위해 RAG1 돌연변이 물고기에 마이코박테리움 마리눔 용액을 주입할 것입니다.

- 먼저, 희석된 박테리아 용액의 5마이크로리터 방울을 파라핀 필름 조각에 파이프로 뿜어냅니다. 그런 다음 방울을 30게이지 인슐린 바늘에 당깁니다. 이 실험을 위해 5개월에서 8개월 된 물고기를 사용하는데, 한 마리는 야생형 물고기이고 다른 한 마리는 RAG 돌연변이 물고기입니다.

이 물고기 복부 쪽을 촉촉한 발포 플라스틱 조각의 슬릿에 위치시킵니다. 골반 지느러미 사이에 인슐린 바늘을 45도 각도로 주입합니다. 바늘 입구를 위쪽으로 유지하여 전체 구멍이 복강 내부에 있는지 확인하십시오. 그런 다음 박테리아 용액을 천천히 주입합니다. 그런 다음 바늘을 조심스럽게 제거하고 즉시 물고기를 담수 탱크 물로 채워진 회수 탱크로 옮깁니다.

사용 중인 박테리아 분취액에서 15분마다 7H10 플레이트에서 샘플을 채취합니다. 이 샘플을 섭씨 29도에서 5일 동안 배양하여 감염 용량을 확인합니다. 물고기의 안녕을 정기적으로 확인하고 감염 증상이 있는 물고기는 3-아미노벤조산 에틸 에스테르가 0.02% 이상 함유된 물에서 부화시켜 안락사시킵니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026