제브라피시 환자 유래 이종이식편(zPDX): 암 모델

- 이종 이식편은 한 종에서 채취하여 다른 종에 이식하는 장기 또는 조직입니다. 환자 유래 이종이식편(PDX)은 면역 체계가 완전히 발달하지 않은 제브라피시 유충과 같은 면역 결핍 동물에 환자의 종양 조직을 이식하여 종양 진행 또는 약물 효능을 연구하는 암 모델입니다. 먼저 트리카인 용액에서 48시간 수정 후 유충을 마취하고 E3 배지로 만든 아가로스가 들어 있는 주입판으로 유충을 옮깁니다.

다음으로, 환자 이식 세포의 현탁액을 로드하고 미세 모세관 바늘로 옮깁니다. 현미경으로 미세 모세관 바늘을 사용하여 유충의 난황낭에 세포를 주입합니다. 이제 포도당과 L 글루타민을 함유한 E3 용액에서 주입된 유충을 배양하여 이종 이식 세포의 높은 에너지 수요를 지원합니다.

약물 치료를 위해 이종 이식된 유충을 우물 플레이트로 옮기고, 검사해야 하는 화합물의 수와 용량에 따라 우물을 그룹으로 나누고 화합물을 추가합니다. 통제 그룹을 포함합니다. 처리 결과를 관찰하기 전에 처리 된 유충을 섭씨 32도에서 배양하십시오.

다음 프로토콜에서는 췌장암의 zPDX 모델에서 젬시타빈(gemcitabine)과 나비토클락스(navitoclax) 약물을 연구할 것입니다.

- 제브라피시 유충을 마취한 후 변형된 E3로 채워진 주입판에 옮깁니다. 혼합 세포 현탁액 25마이크로리터를 미세 모세관 바늘에 넣고 바늘을 미세 주입 매니퓰레이터에 삽입합니다. 주입 압력과 시간을 설정하고 수정 후 48시간 후 제브라피쉬의 난황낭에 50-80개의 세포를 주입합니다.

이종 이식 된 제브라 피쉬 유충을 섭씨 32도에서 40ml의 혼합 용액으로 옮깁니다. 10개의 이종이식된 유충을 12웰 플레이트의 각 웰에 놓습니다. 다음으로 유충을 4개 그룹으로 나눕니다.

대조군은 0.1% DMSO를 함유한 E3로 치료하고, 다른 그룹은 젬시타빈 및/또는 나비토클락스로 치료합니다. 모든 유충을 섭씨 32도에서 이틀 동안 부화시킵니다. 이종 이식 유충 치료 후 마취 후 3% 메틸셀룰로오스에 넣습니다.

형광 또는 컨포칼 현미경을 사용하여 측면에서 유충을 이미지화합니다. 그런 다음 Image J와 Graph Pad 소프트웨어를 사용하여 적색 및 녹색 형광 신호의 강도를 정량화합니다.