심장 박리: 제브라피시 심장 발달을 관찰하는 방법

- 제브라피시 심장은 부비동 정맥, 심방, 심실 및 구근 동맥의 4개의 방으로 구성됩니다. 그것은 operculum과 가슴 띠 사이의 복부 쪽의 앞쪽에 위치하며 가슴 지느러미를 지지하는 골격계의 일부입니다. 심장을 해부하기 위해 안락사된 고정 물고기를 인산염 완충 식염수가 들어 있는 페트리 접시에 넣어 물고기 조직의 pH를 일정하게 유지하고 복부 쪽이 위로 향

눈과 아가미 사이에 집게로 물고기 머리를 잡습니다. 마이크로 가위를 사용하여 아가미를 가로질러 앞쪽 배를 가로질러 자른 다음 처음 두 절개 부위를 수직으로 연결합니다. 날카로운 핀셋으로 가슴 지느러미와 그 아래에 있는 가슴 띠를 제거하면 심장을 덮고 있는 막인 은색 심낭이 드러납니다. 심장을 볼 수 있도록 집게로 심낭을 제거합니다. 이제 구근 동맥에 연결된 동맥을 절단하십시오.

다음으로, 심방 아래에 집게를 놓고 체강 밖으로 심장을 퍼냅니다. 집게로 심장을 잡고 다른 집게를 사용하여 심장 외부에 있는 원치 않는 조직을 제거합니다. 다음 프로토콜에서는 다양한 크기의 물고기에서 심장을 해부하여 물고기의 수명 동안 심장의 발달 과정을 이미지화합니다.

- 각 물고기에 숫자-문자 조합을 할당하여 개별 물고기와 그 결과로 해부된 심장을 추적하여 나중에 분석할 수 있도록 합니다. 모든 측정값을 포함한 모든 데이터를 스프레드시트에 입력하고 이러한 레이블을 기반으로 구성합니다. 해부 전에 PCR 튜브 스트립에 추적 번호가 할당된 라벨을 부착하고 튜브를 PBT 또는 추가 분석에 적합한 기타 용액으로 채웁니다. 페트리 접시에서 물고기의 복부 쪽을 위로 향하게 하고 집게로 몸을 안정시키고 머리를 눈과 아가미 사이에 고정합니다. 표준 길이가 12mm 미만인 물고기의 경우 날카로운 집게나 핀홀더의 마이크로 바늘을 사용하여 몸에서 가슴 근육과 지느러미를 제거하여 심장을 드러냅니다.

- 해부 중 겸자의 지속적인 움직임은 물고기를 움직이는 PBT의 전류를 유발할 수 있습니다. 이것은 특히 작은 물고기에게 문제가 됩니다. 이를 위해 마이크로니들을 사용하여 가슴 근육과 지느러미를 제거하고 체강을 열어야 합니다.

- 겸자를 사용하여 심방 아래에 있는 구멍에서 심장을 부드럽게 퍼냅니다. 물고기에 형광 심장 마커가 포함되어 있는 경우 형광 내시경을 사용하여 박리하고 형광으로 심장이 제거되었는지 확인합니다. 심장이 강에서 제거되면 집게를 사용하여 심장을 잡고 마이크로니들을 사용하여 심장 바깥쪽의 여분의 비심장 조직과 심외막을 제거합니다.

표준 길이가 12mm보다 긴 물고기의 경우 스프링 손잡이가 있는 마이크로 가위를 사용하여 세 번 절개합니다. 먼저 아가미를 가로로 자릅니다. 둘째, 앞쪽 배를 또 한 번 가로 절개합니다. 셋째, 두 횡 절단을 연결하는 복부 쪽에 시상 절단을 만듭니다. 날카로운 집게를 사용하여 몸에서 가슴 근육과 지느러미를 제거하여 체강을 열고 심낭의 은빛 조직을 드러냅니다.

이 심낭 조직을 제거하십시오. 그리고 마음이 보이게 될 것입니다. 마이크로 가위를 사용하여 심장 위쪽에 위치한 구근 동맥에 연결된 동맥을 절단합니다. 이 동맥이 절단되면 겸자 끝을 심방 아래에 놓고 집게를 사용하여 심장을 구멍에서 퍼냅니다. 심장과 함께 오는 여분의 조직이 있으면 나중에 제거할 수 있으므로 괜찮습니다. 또는 일부 물고기의 경우 구근을 부드럽게 당겨 심장을 제거할 수 있으며 나머지 심장도 따라갈 것입니다.

- 다른 기술을 사용하는 경우 심방이 쉽게 손상될 수 있으므로 심방의 위치에 주의하십시오. 심장과 함께 제공되는 여분의 조직이 있으면 괜찮으며 나중에 제거할 수 있습니다.

- 심장이 강에서 제거되면 두 개의 겸자를 사용하여 심장을 잡고 여분의 조직을 제거하거나 심장을 잡을 수 있는 한 쌍의 집게와 여분의 비심장 조직을 제거하기 위해 마이크로니들을 제거합니다.