제브라피쉬 뇌 해부: 물고기 신경생물학 기법

- 안락사된 물고기를 해부 침대에 놓고 수술용 칼날을 사용하여 아가미 높이에서 물고기의 목을 베십시오. 복부 쪽이 위를 향하도록 머리를 잡고 뇌와 눈을 연결하는 시신경으로 만들어진 구조인 시신경이 보일 때까지 연조직을 제거합니다.

시신경을 자르고 눈을 제거하십시오. 이제 물고기의 등쪽이 위를 향하도록 방향을 잡고 두개골 부분을 제거하여 뇌를 분리합니다. 조직의 pH를 일정하게 유지하기 위해 해부 매체가 들어 있는 페트리 접시에 뇌를 옮깁니다. 뇌의 각 부분을 관찰한다.

후각구(olfactory bulbs)는 후각 기관에 연결된 앞쪽 끝에 있는 한 쌍의 구조로, 냄새 신호를 감지합니다. 텔렌스팔론은 기억과 관련된 영역을 포함한다. 하베눌라(habenula)는 텔뇌팔론(telencephalon)의 정보를 뇌의 다른 부분으로 전달합니다.

시신경은 감각 정보 처리 센터입니다. 소뇌는 신체 운동 기능과 균형에 중요한 역할을 합니다. 그리고 수질은 척수에서 뇌로 정보를 전달합니다. 다음 프로토콜에서는 성체 제브라피시로부터 뇌를 분리하여 다른 영역에서 신경 줄기세포를 수집합니다.

시작하려면 페트리 접시에 젤 팩을 채워 해부 침대를 준비합니다. 그런 다음 해당 뚜껑으로 접시를 덮고 섭씨 영하 20도에서 배양합니다. 젤이 얼면 냉동실에서 접시를 꺼내 뚜껑 위에 깨끗한 사각형의 여과지를 놓습니다. 종이와 접시를 모두 플라스틱 필름으로 감쌉니다.

다음으로, 모든 미세 해부 기구를 70% 에탄올로 처리합니다. 이 멸균된 도구를 해부 현미경 옆에 놓고 완성된 해부 베드를 광섬유 조명이 있는 현미경 아래에 배치합니다. 즉시 미리 준비된 머리 표본을 해부 침대 위에 놓고 등쪽이 아래를 향하도록 방향을 잡습니다.

그런 다음 가위를 사용하여 머리 뒤쪽에서 입까지 연조직을 세로로 자릅니다. 그런 다음 집게로 두개골 기저부를 노출시키고 인접한 조직을 모두 제거합니다. 다음으로, 머리 뒤쪽에서 시작하여 뇌의 구조 영역으로 이동하면서 두개골의 측벽 중 하나를 자릅니다. 반대쪽 쪽에 대해 이 과정을 반복합니다. 시신경 절단을 진행합니다. 그런 다음 tectum 수준에서 두개골의 가장 측면에 있는 두 면을 제거합니다

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마지막으로 머리의 복부 쪽을 위로 돌립니다. 그리고 집게로 두개골의 가장 정점 부분을 벗겨내어 뇌를 드러냅니다. 그 후, 뇌와 두개골의 나머지 부분을 페니실린 스트렙토마이신이 보충된 DMM F12로 구성된 해부 배지가 들어 있는 접시에 옮깁니다. 현미경 아래에 있는 마이크로나이프의 플라스틱 손잡이로 신경 구조가 손상되지 않도록 주의하면서 뇌 조직을 청소합니다. 최대 2개의 제브라피시 뇌를 사용하여 전체 뇌 유래 신경구를 생성합니다.