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생물학
0 조회수 • 4:47 분 • April 30th, 2023
- 심근병증은 심장 근육이 약해지고 혈액을 펌프질하는 능력을 잃는 상태이다. 이 상태는 제브라피시에서 재현될 수 있습니다. 먼저, Hanks의 Balanced Salt Solution에서 심장 독성을 담당하는 약물의 원액을 희석하여 여러 작업 농도를 준비합니다. 다음으로, 트리카인 마취된 물고기를 배쪽이 위로 향하게 하여 해부 현미경 아래의 홀딩 스펀지에 놓습니다. 골반 지느러미 사이의 바늘을 수평에서 45도 각도로 배치합니다.
이제 바늘을 복강에 1-2mm 부드럽게 밀어 넣고 약물 용액을 천천히 주입합니다. 용액이 새는 것을 방지하기 위해 바늘을 뽑기 전에 5초 동안 기다리십시오. 즉시 물고기를 담수 시스템이 담긴 깨끗한 수조로 옮기십시오. 심각한 심장 독성, 심장 근육 손상으로 인해 매일 죽는 물고기의 수를 기록하십시오. 이 약물은 심근세포 세포막에 존재하는 사멸 수용체에 결합하여 세포사멸을 유발하여 심각한 심장 독성을 유발합니다.
각 약물 농도에 대한 시간 경과에 따른 생존 확률을 표시하는 그래프인 생존 곡선을 생성합니다. 이 예에서는 독소루비신(DOX)을 주사하여 두 가지 방법으로 성체 제브라피시의 심근병증을 유도합니다.
물고기에게 DOX를 주입하기 전에 24시간 동안 물고기를 단식하십시오. 다음으로 물고기를 그룹화합니다. 마취된 상태에서 깨끗한 여과지를 사용하여 각 물고기를 말리고 체중을 측정합니다. 모두 같은 체중의 10% 이내에 있는 물고기 그룹을 만들어 각 그룹에 동일한 용량의 DOX를 주입할 수 있습니다. 다음으로, 각 그룹에 대한 DOX의 작업 농도를 계산하여 각 그룹에 5마이크로리터의 용액을 주입하고 체중에 따라 동일한 용량의 DOX를 받도록 합니다.
그런 다음 DOX 스톡을 1x HBSS로 희석합니다. 희석액을 와류와 혼합한 다음 희석액을 펄스 스핀하여 튜브에 함께 모이도록 합니다. 주입을 위해 주입 플랫폼을 준비하십시오. 깨끗한 100mm 페트리 접시에 스펀지를 놓습니다. 해부 현미경의 도움으로 스폰지에 구멍을 잘라 물고기 한 마리를 담을 수 있으며 일반적으로 4cm가 작동합니다.
그런 다음 34게이지 바늘에 10마이크로리터 마이크로 주사기를 부착합니다. 그런 다음 1x HBSS로 바늘을 헹구어 주사기와 튜브에서 기포나 블록을 제거합니다. 이제 트리카인으로 성인 물고기를 잠시 마취하십시오. 그런 다음 스펀지를 트리카인이 함유된 배아 물에 담그고 복부를 위로 향하게 하여 스펀지에 물고기를 옮겨 주사를 맞힙니다. 이제 약 1-2mm 깊이의 골반 지느러미 사이의 정중선에 바늘을 45도 각도로 빠르게 삽입하여 복강내로 DOX 용액을 주입합니다.
그런 다음 모든 DOX 솔루션을 천천히 해제합니다. 바늘을 집어넣기 전에 5초 동안 기다립니다. 또는 물고기를 내부가 오른쪽에 있도록 측면으로 배치할 수 있습니다. 그런 다음 45도 각도와 3-4mm 깊이로 7시 방향을 향하도록 경사가 위로 향하도록 골반 지느러미 위의 측선을 주입합니다. 두 가지 주사 방법 중 하나가 성공적이면 배에 붉은 색조가 나타납니다.
주입 후 물고기를 회복할 수 있는 깨끗한 시스템 물로 채워진 깨끗한 건널목 탱크로 빠르게 옮깁니다. 그런 다음 HBSS로 바늘을 헹구고 다음 물고기를 주입합니다. 나중에 주입된 물고기를 순환이 흐르는 시스템으로 되돌려 놓되 교차 오염을 방지하기 위해 메인 시스템과 분리하십시오. 다음 24시간 동안 물고기를 계속 금식하십시오. 첫 주 동안, 주사 후 매일 물고기를 확인하고 죽은 물고기를 제거하십시오.