BC 세포 공동 배양: 암세포 증식을 연구하기 위해 뼈 조각과 함께 유방암 세포 배양

먼저 뼛조각 조각을 test and control이라고 표시된 두 개의 세포 배양 플레이트에 넣습니다. 각 플레이트 중앙에서 유방암 세포를 발현하는 적절한 양의 생물 발광을 피펫팅하고 세포 부착을 돕기 위해 특정 기간 동안 플레이트를 배양합니다. 시험판의 뼈 귀지에 작은 뼈 절취제를 놓고 압력을 가하여 고정합니다.

성장 보조제인 소 태아 혈청이 든 세포 배양 배지를 각 플레이트 면에 천천히 부어 외식을 담그고 특정 기간 동안 섭씨 37도에서 배양합니다. 시험판의 뼈 조직은 사이토카인(cytokine) 및 SRC 키나아제(SRC kinase)와 같은 용해성 인자를 방출하여 유방암 세포를 끌어당겨 이동을 일으킵니다. 각 플레이트에 기판을 추가하고 플레이트를 생물 발광 이미징 챔버에 놓습니다.

생물발광 단백질을 발현하는 암세포는 기질을 산화시켜 빛을 방출합니다. 소프트웨어를 사용하여 각 세포에서 방출되는 총 광자를 측정하여 증식을 정량화합니다. 시험판에 있는 암세포는 대조판에 있는 세포보다 더 빨리 증식해야 합니다. 다음 프로토콜에서는 유방세포 증식을 측정하기 위해 대퇴골 이식에 인접한 유방암 세포를 공동 배양합니다.

이 실험을 위해 DMEM 50마이크로리터당 100,000개의 세포와 10% FBS가 있는 유방암 세포 현탁액을 준비합니다. 또한 뼈 조각을 고정하기 위해 뼈 왁스 플러그를 준비하십시오. 마이크로피펫 팁의 잘린 끝을 사용하여 플러그를 페트리 접시에 보관하십시오. 그런 다음 집게를 사용하여 플러그를 6웰 플레이트로 옮기고 멸균 장갑을 사용하여 플러그를 12시 위치로 누릅니다.

다음으로, 50 마이크로 리터의 세포 현탁액을 각 웰의 중앙으로 피펫으로 주입합니다. 세포 부착을 촉진하기 위해 조직 배양 인큐베이터에 플레이트를 45분 동안 놓습니다. 플레이트가 배양하는 동안 뼈 조각을 추출합니다. 세포를 플레이트에 부착 한 상태에서 뼈 조직 조각을 3 개의 웰에있는 뼈 왁스에 놓고 롱거를 사용하여 각 부분을 누릅니다. 단편이 없는 3개의 우물이 제어 역할을 합니다.

다음으로, 각 웰의 벽에 5ml의 DMEM과 10% FBS를 천천히 추가합니다. 뼛속과 뼛조각이 빠져서는 안 됩니다. 그런 다음 20-24시간 동안 배양물을 배양합니다. 다음 날, 세포를 이미지화합니다. 먼저 각 웰에 밀리리터당 300마이크로그램의 루시페린을 첨가한 다음 즉시 IVIS 이미징 플랫폼으로 플레이트를 이미지화합니다.