Intraductal Injection: 마우스 유선의 관으로 주입 혼합물을 전달하기

관내 주사는 암세포, 발현 벡터 또는 추적자 염료가 보충된 치료제를 포함할 수 있는 주사 혼합물을 유선의 관으로 전달하는 기술입니다.

이 절차에서는 주사기에 주입 혼합물을 로드합니다. 다음으로, 마취된 마우스 복부 쪽이 위로 향하게 하여 수술 침대에 놓습니다. 서혜부 또는 다섯 번째 유선(mammary gland) 사이의 피부를 절개합니다. 두정복막에서 피부 피판을 조심스럽게 분리하여 유관 나무를 시각화합니다.

집게를 사용하여 젖꼭지를 들어 올리고 외부 부분을 조심스럽게 잘라 덕트 개구부를 봅니다. 핀셋을 사용하여 피부 플랩의 가장자리를 들어 올리고 주사기 바늘을 젖꼭지에 부드럽게 삽입하여 주입 혼합물을 전달합니다. 추적자 염료가 유관 나무로 이동하는 것을 모니터링합니다. 염료는 기질로 누출되지 않고 덕트 나무에 퍼져 성공적인 주입을 나타냅니다.

엎지르지 않도록 몇 초간 기다렸다가 주사 부위에서 바늘을 천천히 빼냅니다. 상처 클립으로 절개 부위를 봉합합니다. 다음 프로토콜에서는 아데노바이러스를 발현하는 Cre를 마우스 유선에 전달하기 위해 관내 주사를 수행합니다.

수술 과정 전반에 걸쳐 무균 기술을 사용하십시오. 두 개의 제4 서혜부 유선(subuinal mammary gland) 사이에 약 1cm 길이의 피부 절개 부위를 만듭니다. 유관 나무를 시각화하기 위해 두정복막에서 피부 피판을 조심스럽게 분리합니다.

워치메이커 집게로 젖꼭지를 조심스럽게 잡고 미세 해부 가위를 사용하여 주변 피부를 자르지 않고 외부 젖꼭지를 제거합니다. 약 3-5마이크로리터의 Cre 아데노바이러스 주입 혼합물을 33게이지 금속 허브 바늘이 부착된 25마이크로리터 Hamilton 주사기에 로드합니다.

혼합물에 포함된 파란색 염료를 기준으로 주사기 내 주입 혼합물의 부피를 추정합니다. 가늘고 구부러진 핀셋으로 피부 피판의 가장자리를 부드럽게 잡고 Cre 아데노바이러스 주입 혼합물을 유두에 천천히 주입하면서 파란색 염료가 유관 나무로 퍼지는 것을 모니터링합니다. 관 내강이 손상되지 않도록 주입 속도를 가능한 한 느리게 유지하십시오.

성공적인 관내 주입은 주입된 유체가 기질 구획으로 누출되지 않고 전체 유관 나무에 퍼짐으로써 나타납니다. 주입된 액체가 누출되지 않도록 젖꼭지에서 바늘을 부드럽게 빼냅니다. 유선의 원위부 또는 주입된 유두의 주변 부위를 검사합니다.

여기에서 볼 수 있듯이 염료가 주변 기질로 확산되는 것은 성공적인 유관 내 주사라기보다는 유방 지방 패드 주사를 나타냅니다. 상처 클립으로 수술 상처와 피부를 봉합합니다.

마취에서 마우스를 제거하고 회복을 위해 깨끗한 케이지 내부의 가열 패드에 놓습니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 유방 종양의 발달을 모니터링합니다.