India Ink Inflation: 종양 결절을 시각화하기 위한 염색 방법

JoVE Encyclopedia of Experiments

암 연구

0 조회수 • 3:07 분 • April 30th, 2023

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안락사된 쥐의 복부 쪽을 위로 향하게 하여 수술 침대에 놓고 동물의 팔다리를 고정하는 것으로 시작합니다. 가위를 사용하여 흉곽을 통해 정중선을 따라 침샘까지 자릅니다. 기관 아래에 피펫 팁을 놓아 기관을 들어 올리고 분리합니다. 수술 침대를 180도 회전합니다. 인도 잉크 얼룩이 있는 주사기 바늘을 기관에 삽입하고 저항이 느껴질 때까지 잉크를 폐에 주입합니다.

암세포는 세포 표면에 강한 음전하를 생성하는 젖산을 다량 분비합니다. 이러한 세포가 산성 염색인 인도 잉크로 염색되면 세포 표면이 염색을 밀어내고 염색되지 않은 상태로 유지됩니다.

가위를 사용하여 기관을 자르고 핀셋을 폐 아래로 밀어 넣습니다. 동물의 몸에서 폐를 부드럽게 빼냅니다. 폐를 물로 헹구고 Fekete의 용액이 들어 있는 바이알에 옮겨 과도한 얼룩을 제거하고 조직을 흄 후드에 고정합니다. 종양 결절은 어두운 배경에 흰색으로 나타납니다.

다음 프로토콜에서는 폐 전이를 검증하기 위해 인도 잉크 팽창 기술을 수행합니다.

원발성 종양이 폐로 전이되었는지 확인하려면 먼저 마우스를 폴리스티렌 보드의 앙와위 위치에 놓고 다리를 고정하여 기관에 방해받지 않고 접근할 수 있도록 합니다. 마우스에 70% 에탄올을 뿌립니다. 그런 다음 가위를 사용하여 마우스의 중간 복부 정중선을 따라 흉곽을 통해 타액선 쪽으로 절개합니다. 기관을 식별합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 주변 조직을 제거합니다.

그런 다음 한 손에 피펫 팁을 잡고 팁을 기관 아래에 끼우고 조직을 부드럽게 들어 올려 몸에서 분리합니다. 기관을 높게 유지한 상태에서 해부 플랫폼을 180도 회전합니다. 그런 다음 반 cc 27 게이지 투베르쿨린 주사기를 기관에 삽입하고 강한 저항이 느껴질 때까지 인도 잉크로 폐를 완전히 팽창시킵니다.

그런 다음 가위를 사용하여 기관을 자릅니다. 한 집게로 마우스를 제자리에 잡고 다른 집게를 폐 아래에 삽입하고 마우스에서 폐엽을 당겨 빼냅니다. 물이 담긴 비커에 폐를 잠시 헹구고 조직을 흄 후드로 옮깁니다. 그런 다음 Fekete의 용액 3ml가 들어 있는 유리 섬광 바이알에 폐를 넣고 용액이 증발하는 것을 방지하기 위해 바이알의 뚜껑을 닫습니다. 몇 분 후, 폐를 페트리 접시에 옮기고 단일, 흰색, 전이성 종양 결절의 수를 세십시오.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026