이 프로토콜에서 대사체 정규화를 위해 세포 수를 세는 것이 왜 중요한가요?

헤모사이토미터를 이용한 세포 계수는 테스트 샘플과 대조군 샘플 간의 세포 수 차이를 고려하여 대사체 데이터의 정확한 정규화를 보장하며, 이는 메타볼로믹스의 신뢰성 있는 비교 분석을 위해 필수적입니다.

이 워크플로우에서 얼음처럼 차가운 아세톤이 시료의 무결성에 어떻게 기여합니까?

얼음처럼 차가운 아세톤은 대사 활동을 빠르게 중단시키고 프로테아제(protease)를 억제하여, 용해 후의 대사산물 변화와 단백질 분해를 방지함으로써 샘플링 당시의 in vivo-like 대사산물 프로파일을 보존합니다.

대사체 프로파일링을 위한 테스트 샘플 생성에서 에스트라디올 처리는 어떤 역할을 합니까?

에스트라디올(Estradiol) 처리는 유방암 세포의 에스트로겐 수용체 알파(estrogen receptor alpha)를 활성화하며, 이는 대사체 조성의 측정 가능한 변화를 유도하여 이후 GC-MS 분석에서 처리하지 않은 대조군과 비교하기 위한 실험 조건으로 작용합니다.

대사체 추출 전 세척 단계에서 인산염 완충 식염수가 사용되는 이유는 무엇입니까?

인산완충식염수는 세포 내 대사물질 수준을 변화시키지 않으면서 잔류 배양 배지와 세포 외 오염물을 제거하는 데 사용되며, 이를 통해 이후의 아세톤 추출 과정이 실제 세포 메타볼롬을 반영하도록 보장합니다.

이 시료 준비 방법을 구현하기 전에 어떤 분석 능력이 요구됩니까?

대사체 식별 및 정량을 위해 가스 크로마토그래피-질량 분석법(GC-MS)이 필요합니다. 본 프로토콜은 후속 데이터 생성을 위해 해당 분석 플랫폼과 호환되는 시료를 제작하도록 특별히 설계되었기 때문입니다.

Sample Preparation for Metabolomics: A Method to Prepare Cell Samples for Metabolitecs(대사체학을 위한 시료 준비: 대사체를 위한 세포 시료 전처리 방법)

JoVE Encyclopedia of Experiments

암 연구

0 조회수 • 3:01 분 • April 30th, 2023

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대사체학(Metabolomics)은 세포 내에 존재하는 대사 산물을 확인하고 정량화하는 연구입니다. 샘플을 준비하려면 먼저 test and control이라고 표시된 두 개의 플레이트에 성장 배지와 함께 유방암 세포를 파종합니다. 섭씨 37도에서 3일 동안 배양합니다. 이제 배지를 제거하고 테스트 플레이트에 에스트라디올이 있는 새 배지를 추가하고 제어 플레이트에 일반 배지를 추가합니다.

에스트라디올은 유방암 세포의 에스트로겐 수용체 알파에 결합하여 특정 발현을 유도하여 대사 산물 구성에 변화를 일으킵니다. 원하는 기간 동안 플레이트를 배양합니다. 배지를 얼음처럼 차가운 인산염 완충 식염수 또는 PBS로 교체하여 세포를 세척한 다음 얼음처럼 차가운 아세톤을 첨가합니다. 얼음처럼 차가운 시약은 프로테아제의 작용을 멈추어 단백질 분해를 방지합니다.

이제 스크레이퍼를 사용하여 플레이트에서 세포를 분리하고 피펫을 사용하여 튜브로 옮깁니다. 이 세포 현탁액 20마이크로리터를 혈구계에 넣고 세포 수를 세십시오. 추가 분석에 사용될 때까지 샘플을 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. 다음 프로토콜에서는 기체 크로마토그래피 및 질량 분석을 위해 MCF-7 세포의 샘플을 준비합니다.

텍스트 프로토콜에 따라 배양된 MCF-7 세포를 사용하여 얼음처럼 차가운 1x PBS 5ml를 플레이트에 추가합니다. 그런 다음 PBS를 제거하기 전에 플레이트를 여러 번 기울이십시오. 마지막 세척 후 가능한 한 많은 PBS를 제거하는 것을 두 번 더 반복합니다. 각 플레이트에 750마이크로리터의 미리 냉각된 아세톤을 추가하고 세포를 긁어낸 다음 두 플레이트의 세포를 얼음 위의 2밀리리터 튜브로 결합합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026

Sample Preparation for Metabolomics: A Method to Prepare Cell Samples for Metabolitecs(대사체학을 위한 시료 준비: 대사체를 위한 세포 시료 전처리 방법)

개요

주요 연구 구성 요소

과학 분야

배경

연구 목적

사용된 방법

주요 결과

결론

자주 묻는 질문

산업적 관련성 요약

바이오제약 R&D의 전략적 응용

초기 발견 및 타겟 검증

스크리닝 및 분석법 개발

중개 및 전임상 연구

파이프라인 및 워크플로 통합

운영 및 기업 영향

실행 시 고려 사항

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