Sample Preparation for Metabolomics: A Method to Prepare Cell Samples for Metabolitecs(대사체학을 위한 시료 준비: 대사체를 위한 세포 시료 전처리 방법)

대사체학(Metabolomics)은 세포 내에 존재하는 대사 산물을 확인하고 정량화하는 연구입니다. 샘플을 준비하려면 먼저 test and control이라고 표시된 두 개의 플레이트에 성장 배지와 함께 유방암 세포를 파종합니다. 섭씨 37도에서 3일 동안 배양합니다. 이제 배지를 제거하고 테스트 플레이트에 에스트라디올이 있는 새 배지를 추가하고 제어 플레이트에 일반 배지를 추가합니다.

에스트라디올은 유방암 세포의 에스트로겐 수용체 알파에 결합하여 특정 발현을 유도하여 대사 산물 구성에 변화를 일으킵니다. 원하는 기간 동안 플레이트를 배양합니다. 배지를 얼음처럼 차가운 인산염 완충 식염수 또는 PBS로 교체하여 세포를 세척한 다음 얼음처럼 차가운 아세톤을 첨가합니다. 얼음처럼 차가운 시약은 프로테아제의 작용을 멈추어 단백질 분해를 방지합니다.

이제 스크레이퍼를 사용하여 플레이트에서 세포를 분리하고 피펫을 사용하여 튜브로 옮깁니다. 이 세포 현탁액 20마이크로리터를 혈구계에 넣고 세포 수를 세십시오. 추가 분석에 사용될 때까지 샘플을 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. 다음 프로토콜에서는 기체 크로마토그래피 및 질량 분석을 위해 MCF-7 세포의 샘플을 준비합니다.

텍스트 프로토콜에 따라 배양된 MCF-7 세포를 사용하여 얼음처럼 차가운 1x PBS 5ml를 플레이트에 추가합니다. 그런 다음 PBS를 제거하기 전에 플레이트를 여러 번 기울이십시오. 마지막 세척 후 가능한 한 많은 PBS를 제거하는 것을 두 번 더 반복합니다. 각 플레이트에 750마이크로리터의 미리 냉각된 아세톤을 추가하고 세포를 긁어낸 다음 두 플레이트의 세포를 얼음 위의 2밀리리터 튜브로 결합합니다.

정규화를 위해 세포를 계수하려면 각 처리에 대해 세포 정량화를 위해 두 개의 추가 플레이트를 사용합니다. 그런 다음 플레이트에서 세포를 분리하기 위해 HE 완충액 2ml를 추가하고 5분 동안 배양합니다. HE 버퍼에서 피펫팅을 하여 세포를 철저히 혼합합니다.

그런 다음 혈구계에서 20마이크로리터의 세포 용액을 사용하여 현미경으로 세포 수를 계산합니다. 대사 산물을 식별하고 정량화하기 위해 가스 크로마토그래피 질량 분석 분석을 사용하기 전에 샘플을 섭씨 음의 80도에서 보관하십시오. 텍스트 프로토콜에 따라 통합 분석을 수행합니다.