선암종 생착: 암세포를 쥐의 폐에 이식하는 방법

- 먼저, 폐의 섬유화를 유도하기 위해 암세포 생착 며칠 전에 비리보솜 하이브리드 약물인 블레오마이신을 생쥐에 기관내 주사합니다. 다음으로, 조직 배양 배지에서 폐암 세포주를 성장시킵니다. PBS에서 세포를 희석하여 암세포 현탁액을 준비합니다. 케타민-자일라진 용액을 복강내에 주입하여 전처리된 마우스를 마취합니다.

이제 마우스를 삽관 플랫폼에 등을 대고 앞니를 매달아 삽관 플랫폼에 놓습니다. 입을 벌리고 혀를 부드럽게 빼냅니다. 윗니가 앞니에 닿을 때까지 카테터를 기관에 삽입하고 기관에 원하는 양의 암세포 현탁액을 분사하여 폐에 생물 발광 암세포를 생착시킵니다.

마우스가 전체 볼륨을 흡입할 때까지 기다립니다. 카테터를 부드럽게 제거하고 마우스를 회복 패드에 놓습니다. 며칠 후, 다른 눈에 루시페린을 역궤도 방향으로 주입하고 마우스를 이미저에 올려 놓습니다.

암세포는 산소가 있는 상태에서 루시페린을 옥실루시페린으로 변환하고 빛을 방출하는 루시페라아제를 생성합니다. luminoscore를 계산하여 폐의 종양 부담을 모니터링하기 위한 이미지를 획득합니다. 다음 프로토콜에서는 마우스의 폐 선암 세포의 생착을 수행합니다.

이 프로토콜의 경우 먼저 마우스에 블레오마이신을 주입해야 합니다. 그런 다음 14일 후에 종양 세포를 주입합니다. 두 주사 절차는 매우 유사하며 여기에 설명되어 있습니다.

주사 2시간 전에 블레오마이신 스톡을 얼음에서 해동하고 작업 농도로 희석합니다. 얼음 위에 보관하십시오. 세포 bolus의 경우, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 세포 현탁액을 준비합니다. 각 마우스의 시술 시간은 모두 약 10분입니다. 발가락 꼬집기를 사용하여 적절한 마취를 확인하고 수의사 연고를 눈에 바르십시오.

이때 마우스의 털이 짙은 경우 배쪽과 등쪽 갈비뼈 부분 전체를 면도하여 올바르게 이미지화할 수 있도록 합니다. 그런 다음 등을 플랫폼에 대고 앞니로 마우스를 고정하여 삽관 플랫폼에 마우스를 놓습니다. 세포 덩어리를 주입해야 하는 경우, 부드러운 분쇄로 지금 다시 현탁시킵니다.

이제 가슴 위쪽 부위를 비추고 입을 벌린 다음 편평한 집게를 사용하여 혀를 부드럽게 당겨 냅니다. 바늘을 제거하여 기관용 IV 카테터를 준비한 다음 기관 입구에 놓습니다. 그런 다음 카테터 상단이 앞니 근처에 올 때까지 카테터를 기관에 삽입하고 카테터 내부를 비춰 위치를 확인합니다.

그런 다음 50마이크로리터의 갓 만든 블레오마이신 또는 세포 현탁액을