면역조직화학적 염색: 얇은 조직 절편에서 공간 정보를 얻는 방법

- 부드러운 항원 회수를 위해 암모니아 용액에 얇은 조직 절편을 삽입하는 것으로 시작합니다. 단면을 폴리리신 코팅된 슬라이드로 옮깁니다. 음전하를 띤 세포는 양전하를 띤 폴리리신에 결합합니다. 다음으로, 과산화수소를 첨가하여 내인성 과산화효소 활성을 차단합니다. Tris-Buffered Saline, TBS로 슬라이드를 세척합니다.

TBS는 단백질 가교를 끊어 항원에 대한 항체의 접근을 촉진합니다. 비특이적 항체 결합을 줄이기 위해 블록 용액으로 섹션을 세척합니다. 절편에 1차 항체를 추가하고 밤새 배양합니다. 1차 항체는 세포 표면에 존재하는 특정 항원에 결합합니다. TBS로 슬라이드를 세척하십시오.

1차 항체의 Fc 영역에 부착하는 Biotin 접합 2차 항체를 추가합니다. streptavidin-biotin peroxidase 효소로 섹션을 세척하십시오. 다음으로, peroxidase의 발색 기질을 조직에 첨가합니다. Peroxidase는 발색원을 착색된 불용성 생성물로 변환합니다.

hematoxylin 해결책으로 조직을 counterstain. 헤마톡실린은 세포의 산성 성분에 결합하여 세포를 파랗게 만듭니다. 광학 현미경으로 조직을 관찰합니다. 항원은 빨간색으로 검출되는 반면 세포는 헤마톡실린으로 인해 파란색으로 나타납니다. 다음 프로토콜에서는 기관지 생검에서 CD45 및 CD1a 세포를 확인하기 위해 면역조직화학적 염색을 수행합니다.

- 내장된 생검 조직을 절편하기 전에 칼날이 블록 표면에 평평하게 놓이도록 생검 블록의 각도에 맞게 나이프 홀더를 조심스럽게 조정합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 갓 자른 각 조직 조각을 0.05% 암모니아 및 증류수 용액으로 옮기고 각 기관지 생검 샘플에서 2미크론 두께의 절편 2개 이상을 천천히 자릅니다. 45초에서 90초 후 폴리-l-라이신 코팅 현미경 슬라이드를 사용하여 펼쳐진 각 부분을 집어 올리고 최소 한 시간 동안 절편을 건조시킵니다.

섹션이 건조되면 실험에 적합한 슬라이드에 레이블을 붙이고 각 샘플 주위에 소수성 장벽을 그립니다. 다음으로, 갓 준비한 과산화효소 블록 용액 1ml를 섹션에 적용합니다. 30분 후, 과산화효소 차단 용액을 제거한 다음 TBS로 5분 동안 절편을 3회 세척한 다음 TBS를 제거하고 1% BSA 차단 용액을 추가하여 30분 더 배양하여 비특이적 항체 결합을 차단합니다.

배양이 끝나면 TBS에 희석된 1차 관심 항체를 추가하고 실온