체외 광독성 분석법: 폐암 세포에서 광감작제의 광독성 가능성을 평가하기 위한 PDT 기반 방법

- 광역학 요법 또는 PDT는 특정 파장의 빛에 의해 활성화되는 분자인 광감작제를 사용하는 광선 요법의 한 유형입니다. 여기된 광감작제는 세포에 존재하는 분자 산소를 세포 사멸을 유발하는 활성 산소 종으로 변환합니다. 분석을 시작하려면 적절한 농도의 광감작제를 단독으로 또는 시험 약물과 함께 운반하는 원하는 나노 입자 기반 약물 전달 시스템을 준비합니다.

이 나노 입자 현탁액의 바람직한 농도를 폐암 세포 배양액에 첨가합니다. 나노 입자의 세포 흡수를 촉진하기 위해 적절한 시간 동안 어둠 속에서 배양을 배양합니다. 현탁액을 원하는 배양 배지로 교체하십시오. 그런 다음 광역학 치료 파이버 레이저를 배양 부위 위에 최적의 거리로 배치하여 균일한 조명을 가능하게 합니다. 원하는 시간 동안 적절한 파장으로 세포를 조사하고 밤새 배양합니다.

배지를 적절한 세포 독성 측정 용액으로 교체하십시오. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 세포 생존율을 측정하고 실험적 치료의 세포독성 효과를 정량화합니다. 광감작제를 포함하는 방사선 조사된 세포는 생존력이 감소된 것을 보여줍니다. 다음 프로토콜에서는 A549 폐암 세포에서 히알루론산-세라미드 나노입자에 캡슐화된 광감작제인 하이포크렐린 B와 항암제인 파클리탁셀의 체외 광독성 분석을 수행합니다.

- 시작하려면 함께 제공되는 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 히알루론산-세라마이드를 합성합니다. 3.5 kilodalton 투석막을 사용하여 제품을 정제하고 동결 건조합니다.

다음으로, 히알루론산-세라미드 나노입자 자체, 광감작제와 함께 히알루론산-세라미드 나노입자, 항암제 및 광감작제를 함유한 히알루론산-세라미드 나노입자를 제조합니다.

폐암 세포주 A549를 24웰 세포 배양 플레이트의 웰에 1 곱하기 10의 밀도로 웰당 5번째 세포에 파종하고 24시간 동안 세포를 배양합니다. 다음날 배지를 제거하고 PBS 1ml로 세포를 씻으십시오.

그런 다음 준비된 나노 입자를 PBS에 용해시켜 와류에 의해 광감작제인 하이포크렐린 B의 밀리리터당 2마이크로몰의 최종 농도로 용해시킵니다.

각각 4개의 웰에 PBS 1ml, 빈 히알루론산-세라마이드 나노입자 1ml, 광감작제를 함유하는 나노입자 1ml, 광감작제와 항암제를 모두 함유하는 나노입자 1ml를 첨가합니다.

완료되면 플레이트를 덮고 섭씨 37도에서 어둠 속에서 4시간 동안 배양하여 나노 입자가 세포로 흡수될 수 있도록 합니다. 그런 다음 모든 용액을 제거하