폐 주입 및 고정: 기관에 액체를 주입하고 폐를 고정하여 고정된 폐 용적을 측정합니다.

- 폐 점안은 암 또는 기타 병리학이 있는 쥐의 폐를 분석하기 위해 기관에 물질을 직접 주입하는 데 사용됩니다. 먼저 마취된 마우스를 경사면 삽관 플랫폼에 놓고 목의 털을 면도합니다. 목 아래를 가위로 작게 절개하고 집게를 사용하여 피부를 부드럽게 당겨 기관을 드러냅니다. 입을 통해 기관에 카테터를 삽입하고 절개를 통해 관찰합니다. 예시 액체를 기관에 주입하고 빈 주사기로 공기를 주입하여 폐를 빠르게 팽창시켜 액체를 적절하게 분배합니다.

상처를 봉합하고 마우스를 회복실에 넣습니다. 원하는 기간이 지나면 마우스를 희생하고 폐를 노출시킵니다. 총 폐활량을 정량화하기 위해 고정제로 팽창시킵니다. 고정제가 있는 튜브에 폐를 넣습니다. 아르키메데스의 원리를 사용하여 고정된 폐 용적을 측정합니다. 폐를 물에 넣고 유선 장치로 누르십시오. 물에 잠긴 폐에 의해 옮겨진 물의 무게에 주목하십시오. 고정된 좌측 폐의 폐 용적량은 일반적으로 생체 내에서 측정된 것보다 작습니다.

- 절차를 시작하기 전에 시판되는 1인치 길이의 20게이지 정맥 캐뉼라 끝을 수동으로 약간 구부립니다. 그런 다음 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족으로 마취를 확인한 후 성인 마우스의 눈에 연고를 바르고 큰 사무실 바인더와 봉합 루프가 있는 경사진 플랫폼에 누운 자세로 마우스를 고정합니다. 목의 복부 부분을 면도하고 70% 알코올로 피부를 소독합니다. 그런 다음 날카로운 가위를 사용하여 아래 앞니에서 약 12mm 아래 목을 작게 절개합니다.

그런 다음 집게를 사용하여 기관의 복벽이 보일 때까지 목의 피부를 꼬리 방향으로 부드럽게 당깁니다. 그런 다음 혀를 부드럽게 집어넣고 구부러진 끝이 마우스의 복부 표면 쪽으로 기울어진 상태에서 캐뉼라를 삽입합니다. 방금 시연한 것처럼 목 피부를 다시 부드럽게 당기고 캐뉼라를 기관에 삽입합니다. 기관에서 카테터가 관찰될 수 있으면 카테터를 약 5mm 전진시켜 성대를 통과시킵니다.

이제 50마이크로리터의 점안액이 주입된 젤 로딩 피펫의 끝을 카테터의 하단 허브에 놓습니다. 마우스의 호흡과 동기화된 팁에서 유체의 움직임을 확인한 다음 주입물을 주입합니다. 1밀리리터 주사기를 사용하여 즉시 카테터를 통해 0.6ml의 공기로 폐를 팽창시켜 액체가 폐 깊숙이 분배되도록 한 다음 캐뉼라를 제거합니다. 소량의 시아노아크릴레이트 접착제로 수술 상처를 봉합하고 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 마우스를 개별 케이지에 넣습니다.

마지막 실험 시점이 끝나면 동물의 목을 작게 절개하여 기관의 복부 쪽을 노출시킵니다. 그런 다음 18게이지 스터브 바늘 끝을 기관에 삽입합니다. 실을 사용하여 바늘을 기관에 묶고 정중선 절개로 흉부를 조심스럽게 엽니다. 그런 다음 횡격막을 잘라내고 측면 흉벽을 제거하여 폐를 노출시킵니다. 다음으로, 마개 끝에 포름알데히드를 실행하여 고정 튜브에 공기가 없는지 확인합니다. 그런 다음 포르말린 저장소와 채워진 튜브를 기관 절개술 바늘의 하단에 직접 연결합니다.

포름알데히드의 윗면을 입 높이보다 25cm 높게 놓고 마개를 열어 폐를 고정제로 팽창시킵니다. 최소 20분 동안 폐에 압력을 가한 후 바늘을 천천히 뒤로 당겨 구멍이 없는 기관을 더 많이 노출시키면서 스터브 바늘 끝 너머의 기관을 묶습니다. 기관이 단단히 묶이면 마개를 제거하고 폐를 조심스럽게 절개합니다. 그런 다음 폐를 포름알데히드에 밤새 넣습니다.

여기에서는 플라스틱 피펫과 얇은 20 게이지 와이어로 만든 고정된 폐 부피 동안 폐를 제자리에 고정하는 일반적인 장치가 나와 있습니다. 고정된 폐 용적을 측정하려면 먼저 폐에서 심장과 다른 폐가 아닌 조직을 절개합니다. 다음으로, 와이어 지지 장치가 장착된 약 200ml의 물이 들어있는 비커를 저울에 놓고 장비의 용기를 싣습니다.

그런 다음 장치를 제거하고 폐를 물 표면에 놓고 장치를 사용하여 폐, 봉합사 또는 장치의 일부가 비커의 측면이나 바닥에 닿지 않도록 주의하면서 물 아래의 조직을 누릅니다. 저울에 무게를 기록하십시오. 이 숫자는 치환된 물의 양을 반영하므로 폐 부피를 직접 측정합니다. 그런 다음 와이퍼로 폐를 말리고 장치로 비커의 무게를 다시 싣고 폐 부피 측정을 반복합니다. 그런 다음 두 부피 측정의 평균을 구해야 합니다.