Bromodeoxyuridine 펄스 라벨링 분석: 세포 증식을 측정하는 기법

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- 원하는 세포 밀도를 포함하는 백혈병 세포 현탁액으로 시작합니다. 혈청을 함유한 배양 배지에서 세포를 원심분리하고 재현탁합니다. 혈청 첨가는 지속적인 세포 성장을 촉진하고 세포는 서로 다른 세포주기 단계를 가로질러 이동합니다. 세포를 bromodeoxyuridine 또는 BrdU, 라벨링 용액에 희석하고 필요한 기간 동안 생리학적 조건에서 성장시킵니다.

합성 또는 S-기의 세포는 DNA 복제 과정에서 티미딘을 대체하는 BrdU(티미딘 유사체)를 차지합니다. 세포를 원심분리하여 과도한 BrdU를 제거하고 적절한 배지에서 세포를 재현탁합니다. 세포를 다중 웰 플레이트로 옮깁니다. 세포가 다른 기간 동안 생리학적 조건에서 성장할 수 있도록 합니다.

다양한 기간에서 세포는 S, G2, 유사분열 및 G1 단계의 나머지 단계를 거쳐 다음 세포 주기로 진입하여 세포 증식을 추정할 수 있습니다. 항체 염색을 수행하여 BrdU에 형광색소 항체를 태그하고 유세포 분석을 사용하여 세포 증식을 측정합니다.

유세포 분석기 내부에서 형광 색소는 레이저 에너지를 흡수하고 형광을 발합니다. 증식하는 세포의 수는 관찰된 형광과 직접적인 관련이 있습니다. 예시 프로토콜에서는 급성 림프모구성 백혈병 세포의 맥박 라벨링을 시연합니다.

- 이 프로토콜은 급성 림프모구성 백혈병 세포주인 NALM6를 사용하지만, 모든 비부착 세포주에 적용할 수 있습니다. T-75 배양 플라스크의 NALM6 세포를 공기 중 5% 이산화탄소에서 섭씨 37도의 완전한 RPMI로 유지합니다. 세포를 수집하고 세포 계수를 수행한 후, 밀리리터당 6 세포의 2배에서 10배로 완전한 RPMI로 세포를 재현탁합니다.

BrdU Complete RPMI로 세포 1 in 2를 희석하여 1 곱하기 10의 최종 세포 농도를 밀리리터당 6 세포로 생성합니다. BrdU는 잠재적인 돌연변이 유발 물질 및 기형 유발 물질이므로 주의해서 다루십시오. 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소를 넣고 45분 동안 배양합니다.

다음으로, 완전한 RPMI로 세포 1/10을 희석합니다. 150배 G에서 5분 동안 원심분리기를 하고 상층액을 모두 조심스럽게 버립니다. 소량의 Complete RPMI로 세포를 재현탁하고, 세포 계수를 수행하고, 세포 농도를 1 곱하기 10에서 밀리리터당 6 세포로 조정합니다. 1ml의 세포를 48웰 플레이트의 각 웰에 피펫팅합니다.

1ml의 DPBS를 비어있는 웰에 피펫팅하여 보다 재현성 있는 결과를 얻습니다. 실험 설계의 측정 목표에 따라 원하는 시점 동안 공기 중 5% 이산화탄소에서 섭씨 37도에서 배양합니다. 배양이 완료되면 모든 세포를 FACS 튜브로 옮깁니다.

각 웰을 1밀리리터 부피의 PBS로 순차적으로 헹구어 최종 총 부피가 5밀리리터가 되도록 합니다. 150배 G에서 5분 동안 원심분리기를 하고 조심스럽게 모든 상층액을 제거합니다. 이제 세포를 염색할 준비가 되었으며 즉시 염색을 수행해야 합니다. 표면 염색이 필요한 경우 고정 전에 지금 수행해야 합니다.

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Last updated: 4 July 2026