0 조회수 • 3:27 분 • April 30th, 2023
- 2D 공동 배양 시스템에서는 여러 세포 유형이 평평한 배양 플레이트에서 함께 성장합니다. 이 배양 시스템은 in vitro에서 세포 상호 작용 및 행동에 대한 연구를 용이하게 합니다. 골수 기질 세포(BMSC)와 백혈병 세포 공동 배양을 확립하려면 BMSC의 부착 단층 배양에 백혈병 세포 현탁액을 추가합니다.적절한 배양 조건에서 플레이트를 배양합니다. 4일마다 배양 배지의 90%를 교체하여 공동 배양을 유지합니다.
이 2D 공동 배양 동안 백혈병 세포는 BMSC와 상호 작용하고 배양의 고유한 영역으로 국소화되어 3개의 하위 집단을 형성합니다. 위상차 현미경을 사용하면 세 가지 하위 집단을 시각적으로 구별할 수 있습니다. 배지에서 자유롭게 떠다니는 것처럼 보이는 첫 번째 백혈병 세포 그룹은 부유 세포로 분류됩니다. BMSC 단층의 표면에 부착된 두 번째 백혈병 세포 그룹은 밝게 나타나며 위상 밝기 세포로 분류됩니다.
단층 아래로 이동한 백혈병 세포의 세 번째 그룹은 희미하게 나타나며 위상 희미한 세포로 분류됩니다. 다음 프로토콜에서는 급성 림프모구 백혈병 또는 ALL 세포와 인간 골수 기질 세포의 공동 배양을 수행합니다.
- 10 밀리리터의 종양 특이 배양 배지에 있는 5-20 배 10-6번째 백혈병 세포를 80%에서 90%의 융합 골수 기질 세포 또는 조골세포로 구성된 100mm 플레이트에 파종하는 것으로 시작합니다. 4일마다 플레이트를 옆으로 기울이고 배지 1ml를 제외한 모든 배지를 흡인하고 부착된 세포층을 방해하지 않도록 주의하십시오. 그런 다음 9ml의 새로운 백혈병 세포 배양 배지를 측면을 따라 플레이트 모서리에 조심스럽게 첨가하여 부착 세포의 파괴를 최소화합니다.
공동 배양 12일째 후, 배양 배지를 플레이트 위로 약 5-10회 부드럽게 피펫팅하여 부유 백혈병 세포를 수집하고 세포를 15ml 원추형 튜브로 옮깁니다. 그런 다음, 방금 설명한 것처럼 80%에서 90%가 합류하는 골수 기질 세포 또는 조골세포로 구성된 새로운 플레이트에 세포를 다시 파종합니다. 4일차까지 3개의 백혈병 세포 하위 집단이 형성될 것이며, 부유 백혈병 세포는 배지에서 자유롭게 떠다니고, 위상 밝은 백혈병 세포는 부착 세포 단층의 표면에 부착되며, 위상 희미한 백혈병 세포는 단층 아래로 이동합니다.