G-10 컬럼 기반 백혈병 세포 분류: 골수 기질 세포에서 급성 림프구 백혈병 세포를 정제하는 방법

- 먼저 세포 해리를 위해 골수 기질 세포와 공동 배양된 백혈병 세포가 들어 있는 플레이트에 트립신을 추가합니다. 세포 생존력을 유지하기 위해 예열된 매체를 사용하여 펠릿을 원심분리하고 다시 현탁시킵니다. G-10 란은 젤 모체를 형성하기 위하여 물에서 부풀어 오르는 교차 결합된 dextran 구슬을 포함한다.

G-10 컬럼을 예열된 매체로 평형을 이루어 비드 사이의 공간을 채우고 컬럼에서 매체가 천천히 제거되도록 합니다. 기포 형성을 방지하기 위해 컬럼의 온도를 적절하게 유지하십시오. 세포 혼합물을 G-10 컬럼의 겔 비드에 천천히 로드합니다. G-10 컬럼의 세포를 원하는 기간 동안 실온에서 배양합니다. 세포 표면의 특성과 크기에 따라, 겔 비드는 더 큰 골수 기질 세포를 우선적으로 제한하여 백혈병 세포의 분리를 허용합니다.

예열된 배지를 컬럼에 추가하고 백혈병 세포의 현탁액을 수집합니다. 세포 현탁액을 원심분리하고 펠릿을 적절한 완충액에 재현탁합니다. 추가 분석을 위해 순수 백혈병 세포 집단을 사용합니다. 다음 예에서는 G-10 컬럼을 사용하여 기질 공동 배양에서 순수한 백혈병 세포 집단을 분리합니다.

- 각 하위 모집단에 대해 마개를 완전히 닫은 상태에서 1000 마이크로 리터 피펫을 사용하여 준비된 G-10 컬럼 중 하나의 상단에 1 밀리리터 부피의 전체 셀을 떨어뜨려 세포가 G-10 펠릿 위 또는 내부에 남아 있는지 확인합니다. 세포가 실온에서 20분 동안 G-10 펠릿에서 배양하도록 합니다. 그런 다음 1-3ml의 신선하고 예열된 배지를 컬럼에 추가하고 스톱콕을 열어 배지가 천천히 컬럼을 현저하게 떨어지도록 합니다.

예열된 매체를 1-2ml 단위로 컬럼에 계속 추가합니다. 총 15-20ml의 백혈병 세포가 채취되면 마개를 닫고 채취 튜브를 닫습니다. 그런 다음 세포를 스핀다운하고 펠릿을 적절한 다운스트림 분석 버퍼에 재현탁합니다.