쥐 뒷다리에서 채취한 골수

- 골수는 뼈의 속이 빈 중앙에 존재하는 해면질 젤라틴 조직입니다. 여기에는 면역 체계의 핵심 구성 요소인 혈액 세포를 생산하는 조혈 줄기 세포가 포함되어 있습니다. 대퇴골 및 경골과 같은 더 큰 뼈에서 골수를 분리하면 높은 세포 수율을 얻을 수 있습니다.

골수를 채취하려면 안락사시킨 쥐를 누운 자세로 놓고 에탄올을 사용하여 피부를 살균합니다. 복강을 절개하고 피부를 제거하여 뒷다리를 노출시킵니다. 다리의 긴 뼈인 경골을 부러뜨리고 차가운 PBS에 넣어 생리적 상태를 유지합니다. 슬개골을 탈구하고 근육을 제거하여 대퇴골, 즉 허벅지 뼈를 노출시킵니다.

뼈 바닥에서 대퇴골을 잘라내고 차가운 PBS에 넣습니다. 더 작은 부피의 미세 원심분리기 튜브에 구멍을 뚫고 뼈의 열린 끝이 구멍을 향하도록 두 뼈를 모두 넣습니다. 뼈가 들어 있는 튜브를 더 큰 부피의 미세 원심분리기 튜브에 넣고 이중층 튜브를 원심분리하여 골수를 펠릿화합니다. 추가 분석을 위해 적출된 골수를 사용합니다. 이 프로토콜에서는 쥐의 뒷다리에서 골수를 채취합니다.

- 골수 채취를 위해 6-10주 된 C57 black-6 마우스를 멸균 수술 패드에 누운 자세로 놓고 70% 에탄올을 사용하여 복부와 뒷다리를 살균합니다. 절제 수술용 가위를 사용하여 복강을 열고 피부를 제거하여 뒷다리를 노출시킵니다. 한 쌍의 뭉툭한 팁 드레싱 집게를 사용하여 발목 바로 아래에 마우스 경골을 잡고 한 쌍의 곡선 드레싱 집게를 사용하여 뭉툭한 팁 드레싱 집게 아래의 경골을 안정화합니다.

경골을 차가운 PBS에 넣기 전에 뭉툭한 팁 드레싱 집게를 사용하여 경골을 부러뜨리고 근육을 제거하여 뼈를 노출시킵니다. 안정화 곡선 드레싱 겸자를 대퇴골로 이동하고 무딘 팁 드레싱 집게를 무릎 관절 아래로 밀어 슬개골을 고정합니다. 부드럽게 위로 당겨 슬개골을 탈구시키고 슬개골에서 근육을 제거하여 대퇴골을 노출시킵니다. 곡선형 드레싱 집게로 노출된 대퇴골을 잡고 수술용 가위를 사용하여 뼈 바닥에서 대퇴골을 자릅니다. 그런 다음 대퇴골을 PBS에 놓습니다.

그런 다음 18게이지 바늘을 사용하여 0.5ml 미세 원심분리기 튜브에 구멍을 뚫고 뼈의 열린 끝이 구멍 안쪽을 향하도록 튜브에 두 뼈를 모두 넣습니다. 0.5ml 튜브를 1.7ml 마이크로 원심분리기 튜브에 넣고 마이크로 원심분리기에서 이중층 튜브를 회전시킵니다. 원심분리가 끝나면 골수가 튜브 바닥까지 추출되었는지 확인합니다.