골수 유래 수지상 세포 생성: 마우스 골수에서 수지상 세포를 생성하는 방법

- 수지상 세포 또는 DC는 T 세포를 활성화하는 핵심 항원 제시 세포입니다. 백혈병 환자에서 이러한 세포는 종양 관련 항원을 제대로 발현하지 못하고 항원 특이적 면역 반응을 유도하지 못합니다. 수지상 세포는 골수에 풍부합니다. 따라서 골수는 암에서 골수의 역할을 연구하는 데 도움이 되는 격리 장소로 선호됩니다.

수지상 세포를 얻으려면 안락사된 쥐의 대퇴골 또는 경골 뼈에서 배지로 채워진 주사기를 사용하여 골수를 추출하여 씻어냅니다. 펠릿을 원심분리하고 암모늄-염화물-칼륨 또는 ACK 완충액에 재현탁시켜 적혈구를 용해합니다. 이제 배양 배지를 추가하여 용해 및 원심분리기를 중지합니다. 항생제를 함유한 배양 배지에 펠릿을 재현탁시킵니다. 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 또는 GM-CSF를 추가하고 세포 현탁액을 페트리 플레이트로 전달합니다.

원하는 시간 동안 플레이트를 배양합니다. GM-CSF는 전구세포가 수지상 세포로 분화하는 데 도움이 됩니다. 마지막으로, 수지상 세포의 표면 수용체에 결합하는 지질다당류 또는 LPS로 세포를 활성화하여 완전히 성숙하고 면역원성 골수 수지상 세포를 만듭니다. 이 프로토콜에서는 마우스 골수에서 수지상 세포의 생성을 시연합니다.

- 골수 유래 수지상 세포를 생성하려면, 시연된 바와 같이 야생형 또는 Factor B 녹아웃 마우스의 대퇴골에서 골수를 분리하고, 적혈구를 5ml의 ACK 용해 완충액에 용해시켜 5분 후에 1% FBS를 보충한 10ml의 RPMI로 반응을 정지시킵니다.

원심 분리에 의해 전혈 세포를 채취 한 후, 펠렛을 10 밀리리터 배양 배지에 2 배 10 밀리리터 농도로 재현탁시키고 GM-CSF 밀리리터 당 20 나노 그램을 세포에 첨가 한 후, 6 일 동안 섭씨 37 도의 100 x 15 밀리미터 페트리 접시에 10 밀리리터의 세포를 파종한다. 6일차에 플레이트당 밀리리터당 25마이크로그램의 LPS로 골수 유래 수지상 세포 배양을 활성화합니다.