음성 면역자기 선택: 말초 혈액 단핵 세포에서 B 세포를 정제하는 방법

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말초혈액 단핵세포(PBMCs)는 B 세포, T 세포, 자연살해(NK cell), 단핵구(monocyte)를 포함한다. B 세포는 감염과 싸우기 위해 면역글로불린 분자를 생산합니다. 백혈병에서 이러한 세포는 증식하고 다른 장기로 전이됩니다.

B 세포를 분리하려면 분리된 PBMC를 현탁액으로 시작합니다. 클러스터 오브 분화(cluster of differentiation) 또는 CD라고 하는 특정 세포 표면 분자에 대한 1차 항체 혼합물을 추가합니다. 특정 항체는 T 세포의 CD-3 분자, 단핵구의 CD-14 분자, NK 세포의 CD-16 분자에 결합하여 B 세포는 표지되지 않은 상태로 남습니다.

다음으로, 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 샘플을 세척합니다. 2차 항체 접합 마그네틱 마이크로비드를 샘플에 추가합니다. 2차 항체는 특정 세포에 부착된 1차 항체의 FC 영역에 결합합니다. 라벨링된 세포 현탁액이 들어 있는 튜브를 자기장의 영향 하에 놓습니다. 현장에서는 자기적으로 표지된 세포가 이동하여 튜브 벽에 결합하여 원치 않는 세포의 음성 선택으로 이어집니다. 농축된 B 세포가 포함된 상등액을 새로운 수집 튜브에 수집합니다.

이 프로토콜에서는 만성 림프구성 백혈병 환자의 PBMC에서 백혈병 B 세포의 음성 면역자기 선택을 수행합니다.

상층액을 버리고 pH를 7.4로 조정한 상태에서 0.1% BSA 및 2밀리몰 EDTA를 함유한 PBS인 1ml의 분리 완충액에 1,000만 PBMC를 재현탁합니다. CLL 림프구는 이제 PBMC 제제에서 정제해야 합니다. 그런 다음 마우스 단클론 항 CD-3, CD-14 및 CD-16 1차 항체 10마이크로그램을 추가하고 섭씨 4도에서 30분 동안 배양합니다.

분리 완충액으로 세포를 세척하고 섭씨 4도에서 5분간 500배 g으로 원심분리한 후, 1000만 PBMC를 1ml의 분리 완충액에 재현탁합니다. 세척된 마그네틱 비드 100마이크로리터로 재부유 세포를 섭씨 4도에서 30분 동안 부드럽게 재현탁시키면서 배양합니다. 그런 다음 튜브를 자석 홀더에 2분 동안 놓고 결합되지 않은 세포가 있는 상등액을 5ml 피펫이 있는 새 튜브로 옮깁니다. 이 단계가 끝나면 정제된 CLL 림프구를 사용할 준비가 됩니다.

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Last updated: 25 July 2026