췌장섬 접목: 생체 내 이미징을 위해 췌장섬을 마우스 눈의 전방에 이식하는 방법

- 췌장도에는 인슐린을 분비하는 베타 세포가 있습니다. 제1형 당뇨병 환자에서는 인슐린을 만드는 베타 세포가 기능 장애를 일으킵니다. 이러한 환자에게 섬을 이식하면 혈당 조절을 제공할 수 있는 잠재력이 있습니다. 이식 효율성을 평가하기 위해 안구 전방이 이식 및 생체 내 이미징을 위한 최적의 위치인 마우스와 같은 동물 모델을 사용합니다.

섬을 이식하려면 마취된 마우스를 따뜻한 발열 패드에 놓고 통증을 완화하는 진통제인 부프레노르핀을 마우스 뒤쪽에 피하로 주사합니다. 다음으로, 산소와 마취제인 이소플루란을 지속적으로 공급하기 위해 마우스의 코를 코 마스크에 삽입합니다.

마우스 머리를 헤드 홀더에 고정하여 눈을 노출시키고 뭉툭한 집게를 사용하여 눈꺼풀을 부드럽게 집어넣어 눈을 빼냅니다. 형광으로 표시된 섬이 있는 캐뉼라를 로드합니다. 캐뉼라의 절반 끝을 각막에 삽입합니다. 각막을 들어 올리고, 섬을 부드럽게 분배하고, 캐뉼라를 제거하고, 아이 젤을 바릅니다.

원하는 시간이 지나면 마우스를 이광자 현미경 아래에 놓고 이미지를 촬영합니다. 이식편 전반에 걸쳐 혈관이 미세혈관 네트워크를 형성하는 것을 관찰할 수 있습니다. 다음 프로토콜에서는 마우스의 안구 앞쪽에 인간 췌장 섬 이식을 수행합니다.

시작하려면 마우스를 따뜻한 발열 패드에 놓고 헤드 홀더에 놓고 노즈 마스크를 착용합니다. 엄지와 검지를 사용하여 머리를 약간 들어 올립니다. 측면의 금속 조각으로 고정하고 이어피스가 귀 바로 아래에 머리를 고정하도록 합니다. 피하에서 부프레노르핀 용액을 마우스 뒤쪽에 주입합니다. 뭉툭한 집게를 사용하여 이식할 눈꺼풀을 부드럽게 집어넣습니다. 눈을 튀어나와 폴리에틸렌 튜브로 덮인 핀셋으로 느슨하게 고정합니다.

PBS를 사용하여 섬을 페트리 접시로 옮긴 후 눈 캐뉼라에서 약 20-30개의 섬을 집습니다. 25게이지 바늘을 사용하여 위쪽으로 비스듬하게 만들고 팁을 각막에 조심스럽게 삽입하고 측면을 한 번 절개합니다. 섬이 미리 로드된 캐뉼라로 각막을 조심스럽게 들어 올리고 섬을 눈 안으로 천천히 풀어줍니다. 캐뉼라를 천천히 집어넣고 아이 젤을 눈에 바릅니다.

10분 후 눈꺼풀을 잡고 있는 집게를 제거하고 눈을 원래 위치로 되돌립니다. 이광자 현미경으로 이식된 인간 섬을 이미징하려면 헤드 홀더 플랫폼을 현미경 아래에 놓고 각막과 수정체 사이에 침지 액체로 아이 젤을 눈에 투여합니다. 대물렌즈 아래에 눈을 놓고 텍스트 원고에 설명된 대로 이식된 인간 섬을 이미지화합니다.