Primary Acinar Cell Isolation: 마우스 췌장에서 Acinar 세포를 분리하는 방법

- 췌장 아시나르 세포(pancreatic acinar cell)는 다양한 소화 효소를 포함하는 외분비 세포입니다. 때때로, 발암 신호에 대한 반응으로, acinar cell은 ductal cell로 전환됩니다. 이 관 세포는 나중에 암이 될 수 있습니다. 따라서 췌장암 진행에 대한 역할을 연구하기 위해 acinar 세포를 분리하는 것이 중요합니다.

안락사된 쥐로부터 췌장을 분리하는 것으로 시작합니다. 항생제가 보충된 균형 잡힌 소금 용액이 들어 있는 계량 보트에 췌장을 추가합니다. 가위를 사용하여 췌장을 작은 조각으로 다지고 췌장 조직을 튜브에 추가합니다. 다음으로, 튜브의 췌장 조각에 콜라겐분해효소 용액을 추가합니다.

콜라겐분해효소는 조직을 함께 유지하는 콜라겐을 소화하여 조직이 미세한 조각으로 부서지도록 합니다. 이제 튜브에 혈청 함유 배지를 추가하고 조직을 얼음 위에 놓습니다. 이것은 콜라겐 분해 효소의 작용을 멈추는 데 도움이 됩니다.

조직과 매체를 두 번 여과하고 매번 필터의 메쉬 크기를 점진적으로 줄여 미세 조직 현탁액을 얻습니다. 마지막으로, 생성된 현탁액을 원심분리하여 펠릿 내의 acinar 세포를 수집합니다. 상층액을 제거하고 추가 분석을 위해 acinar 세포를 보관합니다. 다음 프로토콜에서는 안락사된 쥐의 췌장에서 acinar 세포를 분리합니다.

- 안락사된 쥐의 췌장을 해부하려면 먼저 쥐의 발을 폴리스티렌 뚜껑에 고정하고 꼬리가 연구원을 향하도록 방향을 잡고 복부에 70% 에탄올을 뿌립니다. 오토클레이브 집게를 사용하여 정중선의 털과 피부를 들어 올리고, 오토클레이브 가위로 요도 개구부에서 횡격막-흉곽 부위까지 털과 피부를 절개합니다. 왼쪽과 오른쪽을 추가로 절개하여 털과 피부를 잘라내고 복강을 명확하게 볼 수 있습니다.

그런 다음 복막 내벽을 중앙과 오른쪽, 왼쪽으로 자르고 장기에서 떼어냅니다. 집게를 사용하여 장을 들어 올려 마우스의 왼쪽으로 이동하여 짙은 빨간색 타원형 비장에 부착된 밝은 분홍색 췌장을 볼 수 있는 공간을 만듭니다. 췌장 조직은 부드럽고 스폰지 같은 질감을 갖습니다. 위를 따라 달리며 장과 얽혀 있는 췌장을 잘라냅니다.

췌장에서 비장을 분리하고 1X 페니실린-스트렙토마이신이 함유된 HBSS 10밀리리터가 들어 있는 50밀리리터 튜브에 췌장을 넣고 층류 후드로 옮깁니다. 튜브의 내용물을 빈 계량 보트에 붓고 집게를 사용하여 췌장을 휘젓고 씻습니다. 그런 다음 겸자를 사