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암 연구
0 조회수 • 3:21 분 • April 30th, 2023
- 췌장의 외분비 부분은 acinar cell과 ductal cell을 구성합니다. 아시나르 세포는 소화 효소를 합성하여 내강으로 분비합니다. 관 세포는 이러한 효소를 소장으로 전달하는 관을 둘러싸고 있습니다. 유전적 및 환경적 스트레스에 적응하기 위해 acinar 세포는 acinar-to-ductal metaplasia 또는 ADM이라고 하는 덕트 유사 세포로 형태학적, 기능적 변환을 거칩니다.
때때로 ADM은 췌장암의 발병으로 이어질 수 있습니다. ADM ex vivo를 유도하려면 기질 응고를 방지하기 위해 1차 아시나르 세포와 얼음에 보관된 콜라겐 젤을 결합하여 냉각 콜라겐 세포 현탁액을 준비합니다. 테스트 ADM 자극제 또는 관심 억제제로 현탁
액을 치료합니다.현탁액을 배양 플레이트에 분배하고 배양하여 콜라겐 응고를 촉진하고 그 안에 세포를 내장합니다. 다음으로, 응고된 콜라겐 세포층 위에 관심 있는 테스트 ADM 자극제 또는 억제제를 포함하는 배지의 추가 부피를 피펫팅합니다.
적절한 기간 동안 플레이트를 배양합니다. acinar-to-ductal metaplasia induction을 통해 피라미드 모양의 1차 acinar 세포가 transdifferentiate 하여 관 세포와 같은 형태를 가진 세포를 형성합니다. 다음 프로토콜에서는 TGF 알파를 자극제로 사용하는 1차 쥐 아시나르 세포에서 아시나르-관 화생의 생체 외 유도를 입증할 것입니다.
- 콜라겐 젤을 만들려면 얼음 위의 50ml 튜브에 1형 쥐꼬리 콜라겐 7ml, Waymouth 매체의 10배인 700마이크로리터, 0.34몰 수산화나트륨 466.6마이크로리터를 결합하여 콜라겐 젤을 만듭니다. 50ml 튜브에 3시간 배양 후 동일한 부피의 세포 현탁액과 콜라겐 젤을 결합하고 부드럽게 혼합합니다. 플레이트를 얼음 위에 유지하면서 6웰 플레이트에 한 번에 2,000마이크로리터씩 플레이트를 만들고 콜라겐 세포층을 고르게 분포시키기 위해 소용돌이칩니다.
배지를 응고시키려면 섭씨 37도, 이산화탄소 5%의 세포 배양 인큐베이터에서 플레이트를 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 원하는 자극 또는 억제제가 있는 Waymouth의 완전 배지의 1배의 웰당 1.5밀리리터를 추가합니다.
다음 날과 격일로 매체를 변경합니다. 사용된 자극에 따라 아시나르-관 화생 또는 ADM은 3일에서 5일 사이에 관찰될 수 있습니다.
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