자기 바이오프린팅 3D 스페로이드 공동 배양: 암세포와 섬유아세포를 공동 배양하는 방법

0 조회수4:41 • April 30th, 2023

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- 자기 바이오프린팅 3D 공동 배양에서는 여러 세포 유형이 자기장의 영향으로 3D 구조 또는 스페로이드를 형성합니다. 배양을 설정하려면 먼저 암세포와 섬유아세포의 단세포 현탁액을 적절한 배지에 준비합니다. 다음으로, 두 현탁액에 생체 적합성 자성 나노 입자를 추가합니다. 이러한 나노 물질에는 정전기 상호 작용을 통해 자성 입자가 세포막에 비특이적으로 결합하는 것을 촉진하는 양전하를 띤 폴리 L-라이신 잔류물이 포함되어 있습니다.

암세포와 섬유아세포의 최대 자화를 달성하기 위해 배양합니다. 그런 다음 두 세포 현탁액을 원하는 비율로 혼합합니다. 이 세포 나노 입자 현탁액을 세포 부착을 방지하도록 특별히 최적화된 세포 기피성 배양 플레이트로 옮깁니다. 이 설정을 마그네틱 드라이브에 장착하고 배양합니다. 자기력은 자화된 암세포와 섬유아세포의 응집 또는 바이오프린팅을 웰 바닥의 3D 스페로이드 구조로 안내합니다.

스페로이드가 형성되면 자석을 제거하고 3D 공동 배양이 원하는 부피로 성장하도록 합니다. 이 프로토콜에서는 자기 바이오프린팅 기술을 사용하여 췌장암 세포와 PS1 활성화 췌장 섬유아세포 세포에서 3차원 공동 배양 스페로이드를 생성하는 방법을 시연합니다.

표준 무균 조직 배양 기술을 사용하여 적절한 성장 배지에서 T75 플라스크의 관심 암세포와 섬유아세포를 배양합니다. 세포가 70%에서 80% 농도에 도달하면 5ml의 PBS로 배양액을 한 번 세척하고 플라스크당 0.05% 트립신-EDTA 2밀리리터로 섭씨 37도에서 5분 동안 플라스크 표면에서 세포를 분리합니다.

현미경으로 분리를 확인한 후 플라스크당 8ml의 성장 배지로 트립신을 비활성화합니다. 그리고 세포를 몇 번 피펫팅하여 계수를 위한 단일 세포 현탁액을 생성합니다. 원심분리에 의하여 세포를 모으고 신선한 성장 매체에 있는 밀리리터 농도당 6번째 세포에 1 곱 10에 있는 펠릿을 refuse

.

세포를 자화하려면 세포 100마이크로리터당 성장 배지에 10마이크로리터의 NanoShuttle을 첨가하고 용액을 부드럽게 교반합니다. 튜브를 몇 번 부드럽게 뒤집고 cell-NanoShuttle 혼합물을 24웰 플레이트의 개별 웰로 옮깁니다. NanoShuttle이 세포 표면에 쉽게 결합할 수 있도록 부드럽게 흔들어 실온에서 2시간 동안 세포를 배양합니다. 결합 배양이 끝나면 각 자화 세포 현탁액을 피펫팅과 부드럽게 혼합하고 농도를 150마이크로리터의 배지당 네 번째 자화 암 세포 또는 섬유아세포의 1.5배로 조정합니다.

섬유아세포와 암세포를 2:1 비율로 혼합하여 웰당 총 150마이크로리터의 파종 세포를 만듭니다. 더 얇은 자석을 사용하여 96웰 자기 스페로이드 드라이브 위에 세포 기피성 96웰 플레이트를 놓고 각 웰에 150마이크로리터의 세포 혼합물을 시드합니다. 모든 세포가 플레이트가 플레이트에 플레이트가 생성되면 마그네틱 스페로이드 드라이브가 부착된 상태에서 섭씨 37도, 5% CO2에서 밤새 플레이트를 배양합니다. 다음 날 아침, 마그네틱 드라이브를 제거하고 최대 7일 동안 세포를 인큐베이터에 다시 넣습니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026