대장암의 PDOX 마우스 모델 생성: 쥐 모델에서 대장암의 진행 연구

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암 연구

0 조회수 • 3:19 분 • April 30th, 2023

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- 림프절(LN)은 림프절에 존재하는 기질 세포로 인해 종양 성장을 위한 미세환경을 제공합니다. 여포 수지상 세포(FDC)는 대장암 줄기세포와 상호 작용하고 종양 성장을 증가시키는 케모카인, 사이토카인 및 성장 인자를 방출하는 가장 풍부한 유형의 기질 세포입니다.

FDC는 또한 폐 및 간과 같은 장기로의 결절외 전이를 촉진합니다. 결장직장암의 진행을 연구하기 위해 환자 유래 종양 유래 암세포를 장기에 이식하며, 이는 환자 유래 정형이종이식편(PDOX)으로 알려진 면역저하 마우스 모델의 종양 조직형과 일치합니다.

마취된 마우스를 실험실 테이프를 사용하여 해부 보드의 앙와위 자세로 고정하는 것으로 시작합니다. 이제 튜브에 필요한 양의 루시페라아제 태그가 부착된 대장암 세포와 FDC를 혼합합니다. 결과 현탁액을 주사기에 넣습니다. 다음으로, 마우스의 항문 입구를 찾아 준비된 대장암 혼합물을 직장의 점막하층에 주입합니다.

전이성 부담을 관찰하려면 매주 복강내에 루시페린을 주입하고 생물 발광 이미징을 사용하여 마우스를 이미지화합니다. 루시페라아제 효소와 ATP가 존재할 때 암세포의 루시페린은 옥실루시페린으로 전환되어 청록색을 방출합니다. 다음 프로토콜에서는 대장암 진행을 연구하기 위한 정형외과 이종 마우스 모델을 생성합니다.

- CRC 마우스 모델을 만들려면 마취된 6-8주 된 수컷 NOD SCID 마우스를 앙와위 자세로 해부 현미경 아래에 놓고 주둥이를 이소플루란 콧방울에 고정하고 앞다리를 테이프로 고정하여 안정성을 높입니다. 꼬리 밑부분에 작은 거즈 부분과 같은 작은 물체를 놓고 항문을 들어 올려 가시성과 각도를 개선합니다. 구부러지고 윤활된 뭉툭한 끝이 있는 집게를 사용하여 항문관을 확장하고 원위 항문과 직장 점막을 노출시키고 대변을 제거합니다.

멸균 30게이지 탈착식 바늘을 50마이크로리터 유리 주사기에 연결합니다. 이전 단계에서 준비한 10마이크로리터의 종양과 HK 세포 현탁액을 주사기에 주입합니다. 10마이크로리터를 항문관 위 1-2mm 지점의 원위 후방 직장 점막하에 주입하여 골반강으로 들어가지 않도록 합니다. 마지막으로, 이소플루란 콧방울에서 마우스를 제거하고 고통의 징후가 있는지 절차에 따라 1시간 동안 관찰합니다.

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