자발적 전이 마우스 모델: 정소적으로 주입된 대장암 세포의 전이 가능성을 연구하는 플랫폼

JoVE Encyclopedia of Experiments

암 연구

0 조회수 • 2:57 분 • April 30th, 2023

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- 결장직장암 오가노이드를 발현하는 녹색 형광 단백질(GFP) 배양으로 시작합니다. 오가노이드를 수확합니다. 세포 분리 효소 용액으로 처리하여 오가노이드를 단일 세포 현탁액으로 해리합니다. 효소 함유 상등액을 분리하기 위한 원심분리기. 상층액을 제거합니다. 인공 세포외 기질 함유 배지를 사용하여 GFP 발현 대장암 세포를 재현탁합니다. 세포 현탁액을 주사기에 로드하고 얼음 위에 유지하여 주변 온도에서 매트릭스 응고를 방지합니다.

다음으로, 마취된 마우스를 앙와위 자세로 준비합니다. 항문 구멍을 통해 직장의 점막층을 부드럽게 당겨 빼냅니다. 이제, 혈관 네트워크를 포함하는 직장 점막하층에 준비된 GFP 발현 암세포 현탁액을 주입합니다. 마우스가 복구되도록 합니다.

며칠 이내에 주사 부위에서 GFP 발현 원발성 종양이 발생합니다. 자연 전이가 있으면 이러한 종양 세포가 분리되어 순환계로 들어갑니다. 결국, 세포는 먼 장기로 퍼져나가 증식하여 GFP 양성 전이성 종양을 형성합니다. 다음 프로토콜에서는 GFP 발현 결장직장 오가노이드 세포를 이정소 주입하여 결장직장암의 자연 전이 마우스 모델의 생성을 보여줍니다.

- CRC 환자 유래 종양 이종이식편의 자연 전이 마우스 모델을 확립하기 위해, GFP 표지 오가노이드를 해리하고 단일 종양 세포 현탁액을 PBS 50 마이크로리터당 5개의 종양 세포에 50%의 인공 세포외 기질 농도를 보충하여 5배 10으로 희석합니다. 쥐당 50마이크로리터의 세포를 22게이지 바늘이 장착된 주사기에 넣고 종양 세포를 얼음 위에 놓습니다.

다음으로, 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족을 확인하고 첫 번째 마취된 NOG 마우스를 실험실 벤치의 누운 자세에 놓습니다. 멸균 핀셋을 사용하여 항문에서 직장 점막을 부드럽게 빼내고 즉시 종양 세포를 직장 점막하에 주입합니다.

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