레이저 미세해부: 3D 유기형 배양 모델에서 침입하는 대장암 세포를 분리하는 기술

0 조회수3:53 • April 30th, 2023

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- 결장직장암의 3D 유기형 모델은 체내 종양 미세환경을 모방하도록 설계된 체외 배양입니다. 배양액에는 종종 적절한 세포 외 기질 미세환경에서 결장직장암 상피 세포와 공동 배양된 섬유아세포와 같은 기질 세포가 포함됩니다.

확립된 배양에서는 전이 가능성이 있는 종양 세포가 세포외 기질에 침입합니다. 이러한 침입 세포를 분리하려면 먼저 포름알데히드로 유기형 모델을 처리하여 세포와 세포외 기질을 고정합니다. 샘플을 탈수시키기 위해 알코올과 함께 배양하십시오.

다음으로, 조직 블록을 생성하기 위해 액체 파라핀 왁스에 삽입하십시오. 초박 절편을 사용하여 얇게 썬 부분을 얻습니다. 섹션을 적절한 유리 슬라이드에 장착합니다.

Xylene을 추가하여 단면을 파라핀화합니다. 순차적으로, 샘플을 재수화하기 위해 감소하는 에탄올 농도로 섹션을 배양합니다.

Cresyl Violet으로 처리하여 미세환경에서 대장암 세포를 염색하고 구별합니다. 스테인드글라스 슬라이드를 현미경 스테이지에 뒤집어 놓습니다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 미세 해부할 세포를 식별하고 경계를 묘사합니다. 레이저를 발사하여 강조 표시된 부분을 절단하고 미세 절부된 부분을 수집합니다.

다음 프로토콜에서는 레이저 현미해부에 의한 3D 조직형 공동 배양 모델에서 결장직장암 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.

- 우물에서 나일론 시트를 포함한 전체 관능 필름을 제거하고 접착 필름에 놓습니다. 깨끗한 일회용 메스를 사용하여 유기형 시트와 나일론 시트를 이등분하고 실온에서 24시간 동안 포름알데히드로 양쪽 반쪽을 고정합니다. 24시간 후에 포름알데히드를 70% 에탄올로 대체하고 파라핀에 삽입, 절편 및 염색하기 전에 밤새 그대로 두십시오.

레이저 현미해부를 수행하려면 먼저 유기형을 10미크론 두께로 멤브레인에 장착된 슬라이드에 절단합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 절편을 처리한 후 선택한 플랫폼을 사용하여 레이저 현미해부를 수행할 준비를 합니다.

미세 해부할 염색 부분이 있는 유리 슬라이드를 현미경 스테이지에 앞면이 아래로 향하게 놓습니다. 0.5ml 마이크로 원심분리기 튜브를 채취 카세트에 장착하고 미세해부된 조직이 수집될 캡에 50마이크로리터의 세포 용해 버퍼를 추가합니다. 직접 시야 상태에서 조이스틱을 사용하여 관심 조직을 식별하고, 소프트웨어 인터페이스를 사용하여 염색된 유기 단면에 주석을 달아 종양 침입 전선에서 미세 해부할 세포를 강조 표시합니다.

레이저가 발사되도록 지시하면 강조 표시된 부분을 잘라내고 미세 해부된 조직을 미세 원심분리기 튜브의 캡으로 밀어 넣어야 합니다. 관심 분석물을 추출하기 위해 적절한 방법으로 샘플 처리를 진행합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026