환자 유래 이종이식 모델링: 흑색종 마우스 모델을 생성하는 기술

- 환자 유래 이종 이식 또는 PDX 모델에서는 인간 환자의 종양 세포 또는 단편을 면역 결핍 수용 마우스에 이식합니다. PDX 모델은 인간 종양 미세환경의 생물학적 및 분자적 특성을 시뮬레이션합니다. 흑색종 PDX 모델을 개발하려면 먼저 흑색종 환자로부터 종양 조직을 채취합니다. 종양에서 괴사 조직을 제거합니다. 슬러리를 얻기 위해 종양을 다지십시오. 다음으로, 마취된 수혜자 마우스를 엎드린 자세로 준비합니다. 등 쪽 피부를 작게 절개합니다. 피부 바로 아래에 있는 근막이나 느슨한 결합 조직층을 부드럽게 자릅니다. 이것은 기저 근육층에서 피부를 분리하고 종양 이식을 위한 주머니를 만드는 데 도움이 됩니다.

종양 슬러리를 주머니에 부드럽게 옮깁니다. 이제 이식된 종양 세포를 안정화하고 고정하기 위해 인공 세포외 기질을 주머니에 투여합니다. 외과적으로 상처를 스테이플러로 고정하고 쥐가 회복할 수 있도록 합니다. 이식 마우스를 매주 모니터링하여 이종이식 종양의 성장을 관찰합니다. 다음 프로토콜에서는 환자 유래 흑색종 종양 세포를 면역결핍 NSG 마우스에 피하 이식하여 흑색종 환자 유래 이종 이식 모델을 생성하는 방법을 시연합니다.

- 외과적 절제 또는 외과적 생검 조직을 이식하려면 먼저 NSG 6주에서 8주 된 마취 마우스의 허리 아래쪽에서 털을 깎아 약 1.5cm에서 3cm 정도의 털이 없는 부위를 남겨둡니다. 종양 덩어리를 준비하고 페트리 접시에 담긴 종양 슬러리를 외과적 이식을 위해 개별 덩어리로 나눕니다. 메스 날을 사용하여 마우스 뒤쪽 중앙을 약 5mm 길이로 절개합니다. 한 쌍의 집게로 시술자 반대쪽 절개 부위의 피부를 들어 올립니다. 다른 손에는 가위를 들고 작은 가위로 자른 근막을 부드럽게 잘라 근육층에서 피부를 분리하여 종양 조직을 위한 주머니를 만듭니다.

메스 날을 사용하여 종양 덩어리 하나와 종양 슬러리 조직 덩어리 하나를 집어 들고 생성된 주머니에 조직을 부드럽게 넣습니다. 그런 다음 주머니의 종양 조직 더미에 100마이크로리터의 인공 세포외 기질을 추가합니다. 두 쌍의 집게를 사용하여 양쪽 끝의 절개 부위를 당겨 상처 가장자리가 서로 가깝게 오도록 합니다. 그런 다음 하나 또는 두 개의 상처 클립을 적용하여 상처를 봉합합니다. 진통제 1kg당 1-5mg을 피하로 주사합니다. 치유가 완료되면 약 7일 후에 상처 클립을 제거합니다.