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암 연구
0 조회수 • 5:54 분 • April 30th, 2023
- 피부는 서로 다른 층을 채우는 다양한 세포로 구성되어 있습니다. 멜라닌을 생산하는 세포인 멜라닌 세포는 표피-진피 접합부에 국한되어 있는 반면, 결합 조직 생성 세포인 섬유아세포는 진피에 있습니다.
멜라닌 세포와 섬유아세포를 빠르게 분리하려면 먼저 안락사된 새끼 쥐의 몸통을 채취합니다. 몸통의 길이를 통해 피부를 배쪽으로 자릅니다. 표피층과 진피층을 포함하는 피부를 벗겨내고 조직을 작은 조각으로 다집니다.
이제 세포외 기질을 분해하는 트립신(trypsin)과 콜라겐분해효소(collagenase) 효소가 함유된 소화 완충액으로 치료하여 세포를 현탁액으로 방출합니다. 세포를 펠릿화하고 상층액을 버리는 원심분리기. 멜라닌 세포 배지에 세포를 재현탁시키고 현탁액을 멀티웰 플레이트로 전달합니다.
배양 중에 대부분의 섬유아세포는 웰 바닥에 부착되는 반면 멜라닌 세포 및 기타 표피 세포는 현탁 상태로 남아 있습니다. 부유 세포를 흡인하고 섬유아세포 배양액에 섬유아세포 특이적 배지를 추가하여 성장을 촉진합니다. 흡인된 현탁액을 콜라겐이 코팅된 새로운 웰로 옮겨 부착 배양 형성을 돕습니다.
항생제인 제네티신을 보충하고 새로운 멜라닌 세포 성장 배지를 추가합니다. Geneticin은 남아 있는 섬유아세포를 선택적으로 제거하는 반면, 배지는 다른 표피 세포 유형보다 멜라닌 세포의 성장을 촉진합니다. 다음 프로토콜에서는 쥐 새끼 피부에서 멜라닌 세포와 섬유아세포를 분리합니다.
- 층류 캐비닛에서 안락사된 각 쥐의 몸통을 70% 에탄올이 함유된 멸균 페트리 접시에 간단히 굴립니다. 에탄올에서 마우스를 꺼내 빈 멸균 페트리 접시에 넣습니다. 다음으로, 수술용 가위를 70% 에탄올로 살균합니다. 이 가위를 사용하여 몸통의 복부 쪽 피부를 목에서 시작하여 꼬리까지 절개합니다. 멸균 집게를 사용하여 마우스의 몸통에서 피부를 벗겨내고 피부의 진피 쪽에서 과도한 지방 조직을 제거합니다.
진피 면이 아래를 향하게 하여 3ml의 1x 항생제/항진균 용액이 들어 있는 6웰 접시에 피부를 놓습니다. 실온에서 2-3분 동안 배양합니다. 그런 다음 조직 다지기를 켜고 여기에 표시된 설정으로 설정을 조정합니다.
- 티슈 다지기 날을 설치할 때와 기계를 작동할 때 반드시 주의하십시오.
- 진피 쪽이 아래로 향하게 하여 피부를 멸균 조직 다지기 접시에 옮기고 조직 다지기 접시에 피부를 완전히 3회 통과시킵니다. 그 후, 균질화된 피부를 3ml의 피부 소화
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