최소 홍반성 선량 분석: 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법

- 멜라닌 세포는 유해한 자외선을 흡수하여 피부를 보호하는 유멜라닌이라는 어두운 색소를 생성합니다. UV 감도를 측정하려면 먼저 마취된 마우스 모델을 사용합니다. 생쥐의 등쪽 털을 제거하여 표피층을 노출시켜 생쥐를 준비합니다. 노출된 피부에 정해진 수의 구멍이 있는 UV 차단 테이프 조각을 고정합니다. 구멍을 가리기 위해 하나를 제외한 모든 구멍에 작은 분리 가능한 테이프를 고정합니다.

이제 원하는 시간 동안 마우스에 UV 방사선을 노출시킵니다. 노출 기간 동안 미리 결정된 시점에서 나머지 구멍을 순차적으로 마스크 해제합니다. 이것은 연속적으로 노출된 피부 패치가 감소하는 자외선 방사선을 받는 것을 용이하게 합니다. 이 구멍을 통해 자외선이 마우스의 표피에 국부적으로 침투할 수 있습니다.

노출되면 표피 세포는 전염증성 분자를 방출합니다. 이 분자는 진피 쪽으로 확산되어 피부 혈관을 확장시켜 홍반이나 피부 발적을 유발합니다. 그 후, 백혈구는 진피에 침투하여 노출된 부위에 부종이나 부종을 일으킵니다.

실험 종점에서 방사선을 중지하고 테이프를 제거하여 홍반과 부종을 관찰합니다. 다음 프로토콜에서는 최소 홍반 선량을 결정하여 멜라닌 생성 약물인 포스콜린으로 처리된 인간화 마우스 모델에서 UV 민감도를 측정합니다.

- 최소 홍반성 선량(MED)을 결정하기 위해 각 동물은 다양한 자외선 선량에 노출됩니다. 먼저 1제곱센티미터 원형 컷아웃이 있는 견고한 홀 펀치를 사용하여 테이프에 구멍을 뚫고 UV 폐색 테이프 조각을 준비합니다. 테이프의 각 구멍 위에 UV 노출을 위해 제거할 수 있는 작지만 쉽게 분리할 수 있는 테이프 조각을 붙입니다. 마취된 마우스의 등 표면에 테이프를 놓습니다.

동물의 눈이 열려 있으면 건조 및 자외선 노출로 인한 부상을 방지하기 위해 인공 눈물을 바르십시오. 피크 출력이 313나노미터이고 범위가 280 - 370나노미터인 두 개의 UVB 램프로 구성된 UV 소스를 켭니다. l을 허용amp UVB 센서와 함께 UV 광도계를 사용하여 출력을 확인하기 전에 일정한 UV 출력과 평형을 이룹니다.

UV 광도계로 측정한 UV 투과율을 기반으로 원하는 각 선량에 대한 UV 노출 시간을 계산합니다. 예를 들어, 램프의 UVB 출력은 제곱센티미터당 2.4밀리와트를 측정합니다. 따라서 평방 미터당 5킬로줄을 투여하려면 여기에서 계산한 대로 피부가 208초의 UVB 방사선에 노출되어야 합니다.

다음으로, 진정된 동물의 복부 표면을 아래로 내려 자외선에 균일하게 노출되도록 합니다. 선택한 방사선 투여량을 투여하려면 적절한 시간에 구멍을 덮고 있는 작은 테이프 조각을 순차적으로 제거합니다.

예를 들어, 평방 미터당 40킬로줄이 가장 큰 선량인 경우 마우스는 27분 47초 동안 램프 아래에 있고 이 선량에 대한 구멍은 처음부터 노출됩니다. 그러나 제곱미터당 5킬로줄 조건의 경우 노출 시간이 208초 남았을 때 테이프가 제거됩니다. 자외선에 노출된 후에는 테이프를 조심스럽게 제거하고 동물을 따뜻하고 조용한 장소에 두어 마취에서 회복한 후 우리로 되돌려 놓습니다.

최소 홍반성 선량(MED) 값은 노출된 전체 피부 서클의 홍반 및/또는 부종으로 정의된 염증을 유발하는 UV의 최소 선량에 해당합니다. 24-48시간 동안 마우스를 모니터링하여 UV 노출 영역에서 개별 홍반 또는 부종 영역을 찾습니다.

때때로 잔여 털 수염은 기저의 피부 홍반이나 부종을 가려서 MED 테스트의 해석을 혼란스럽게 합니다. 70% 에탄올로 피부를 적시면 피부를 훨씬 더 쉽게 해석할 수 있습니다. 피부 발견 사항을 사진으로 기록한 다음 쥐를 동물 시설로 되돌려 보냅니다.